ГОСТ Р 51352-99
Для определения Т в пробирки вносят компонент, содержащий радионуклид, в объеме,
указанном в инструкции по применению набора, после чего добавляют в пробирки все компоненты
инкубационной среды в объеме, указанном в инструкции по применению набора; центрифугирова
ние не производят.
Радиометрию каждой пробирки проводят в отдельности и определяют среднее арифметическое
значение и значение коэффициента вариации. Достоверность сосчитанных импульсов должна быть
в пределах 1—2 %, коэффициент вариации счета /’-проб не должен превышать 3 %, интенсивность
счета Тдолжна быть не менее 10000 имп/мин для получения достоверности счета с погрешностью
менее 1%.
Специфически связанная радиоактивность (специфическое связывание)
Специфическое связывание определяют с помощью нулевой калибровочной пробы, т. е. при
нулевой концентрации определяемого вещества.
Значение специфического связывания (применяют также термин «максимальное связывание*)
выражают в процентах как отношение значения радиоактивности образца с нулевой концентрацией,
из которого исключено значение неспецифически связанной радиоактивности, к обшей радиоак
тивности образца:
■ух 100,<3>
где В„ — скорость счета в пробирке, содержащей нулевую калибровочную пробу, имп/мин;
7 — скорость счета тотальной радиоактивности, внесенной в аналитическую пробирку,
имп/мин.
Значение специфического связывания дает основную информацию о протекании иммунохн-
мической реакции между антителами и меченым антигеном в данной системе для раднонммуноло-
гического анализа. Его изменения могут бытьобусловлены прежде всего изменениями концентраций
обоих компонентов в реакционной смеси и их свойств, особенно сродства и емкости связи антител,
удельной активности радиоиндикатора и его повреждением, а также изменениями, происходящими
во время хранения или при инкубации. Кроме того, на значение специфического связывания могут
оказать влияние идругие компоненты реакционной смеси, условия инкубации, а также правильность
выполнения процедур сепарации. Любое заметное отклонение значения BJTx 100 (более чем на 5
%) от обычно получаемых значений при данной методике должно служить сигналом о нарушении
стандартных условий определения и качества составных частей набора, а также должно послужить
основанием к дополнительной проверке набора.
Значение специфического связывания определяют следующим образом: в пробирки (8—10 шг.)
вносят нулевую калибровочную пробу и все компоненты реакционной смеси, после чего проводят
все процедуры, предусмотренные инструкцией по применению набора.
В идеале значение специфического связывания должно быть близко к 50 %. Чем ниже этот
показатель, тем меньше разрешающая способность калибровочной кривой набора, поскольку
калибровочная кривая будет более пологой. При высоком значении BJTx 100 чувствительность
набора увеличивается, но «рабочий* отрезок калибровочной кривой уменьшается.
Неспецифически связанная радиоактивность (неспецифическое связывание)
Неспецифическое связывание —это неспецифически связанная радиоактивность в образце
при отсутствии специфических антител.
Определение значения неспецифического связывания дает прежде всего информацию об эффек
тивности используемого метода сепарации свободной и связанной фракций и о неспецифическом
захвате свободного радиоиндикатора в связанной фракция. Причиной ^специфического связывания
прежде всего является неспецифическая сорбция свободного радиоиндикатора на стенках пробирок, на
поверхности осадка и сорбентов. Кроме того, неспепифическое связывание —это влияние перекрест
ных реакций в присутствии эндогенных антител в анализируемых образцах и воздействие некоторых
неспенифическнх факторов вследствие их присутствия в анализируемых образцах.
Поскольку неспецифическое связывание —одна из основных проблем радиоиммунологичес-
кого анализа, его исследование и контроль важны и необходимы. При этом значение неспецифи-
ческого связывания необходимо вычитать из значений полученных радиоактивностей для всех
калибровочных проб.
Неспецифическое связывание определяют следующим образом: в пробирки (8—10 шт.) вносят
нулевую калибровочную пробу (или любую калибровочную пробу, или сыворотку крови человека)
и все компоненты набора, предусмотренные инструкцией по его применению, за исключением
4