ГОСТ Р 70393—2022
Таблица 2 — Корректирование инокулята для количественного метода в зависимости от типа тампона
Наименование изделия
Степень разведения суспензии
с концентрацией 1 х 108КОЕ/мл
Объем
Стандартные тампоны из крученого волокна
1:10
100 мкл на один тампон
«блокированные тампоны
1:10
100 мкл на один тампон
Поролоновые тампоны
1:5
50 мкл на один тампон
Мини-тампоны
1:2
20 мкл на один тампон
Пример — Приработе со стандартным или флокированным тампонами суспензию 1 х 108КОЕ/мл
разводят в 10 раз в стерильном 0,85 %-ном растворе хлорида натрия до концентрации примерно
1 х ю7КОЕ/мл.
7.3.3.2 Инокуляция тампонов и транспортных сред
Приготовленную суспензию разливают в пробирки или в лунки микротитрационных планшетов
по 0,1 мл (при работе со стандартным или флокированным тампонами). При работе с другими типами
тампонов суспензию разливают в соответствии с таблицей 2.
Для каждой комбинации тест-штамм/тампон требуется как минимум шесть пробирок (три для ис
следования инокулята с нулевым временем и три для исследования инокулята после хранения). Также
могут быть испытаны три образца для промежуточных условий хранения, например 24 ч.
Тампоны помещают в инокулят до полного впитывания жидкости (на 10 с). После этого каждый
тампон переносят в пробирки с транспортной средой так, чтобы тампон не доходил до дна пробирки
1,5—2,0 см и не касался ее стенок. Оставляют на хранение в течение 5— 15 мин (нулевое время), 24 ч (если
используется) и 48 ч.
Концентрация инокулята, внесенного тампоном в транспортную среду, составляет приблизитель
но 1 х 106 КОЕ.
7.3.3.3 Определение концентрации тест-штаммов после хранения в транспортных средах
По окончании времени экспозиции тампоны извлекают из транспортной среды и в зависимости
от типа тампона и тестируемой транспортной среды выполняют следующие манипуляции для количе
ственного подсчета КОЕ:
- стандартные тампоны из крученого волокна, хранившиеся в агаризованных транспортных сре
дах, помещают в пробирку, содержащую 1 мл 0,85 %-ного физиологического раствора (pH от 6,8 до 7,2),
содержимое которой энергично перемешивают тампоном или с помощью вихревой мешалки, не удаляя
тампон как минимум 10— 15 с. Данную пробирку принимают за первое разведение (1-е разведение).
Примечание — Поскольку при перемешивании (встряхивании) может образовываться аэрозоль, перед
встряхиванием пробирку необходимо закрыть крышкой;
- для тампонов с флокированным или поролоновым наконечником, хранившихся в жидкой транс
портной среде, не требуется данной процедуры разбавления. Пробирка с жидкой транспортной средой
является первым разведением (1-е разведение);
- с помощью пипетки переносят 0,1 мл содержимого из пробирок 1-го разведения в пробирку с
0,9 мл 0,85 %-ного хлорида натрия (pH от 6,8 до 7,2). Далее проводят три десятикратных разведения в
0,85 %-ном растворе хлорида натрия.
Примечание — При извлечении тампонов из физиологического раствора или жидкой транспортной
среды аккуратно открывают пробирку, чтобы избежать попадания аэрозолей, тщательно отжимают тампон враще
нием о стенки пробирки, удаляют его и обеззараживают.
По 0,1 мл суспензии из всех полученных разведений высевают на чашки Петри с соответствующей
питательной средой для каждого используемого тест-штамма. По окончании инкубации подсчитывают
количество выросших колоний и усредняют КОЕ. Для получения достоверных результатов необходимо
учитывать чашки Петри, засеянные после нулевого времени хранения, в которых выросло от 25 до
250 КОЕ.
7.3.3.4 Критерии приемлемости для количественного метода элюирования тампоном
а) Образцы, хранившиеся при контролируемой комнатной температуре (от 20 °С до 25 °С)
Результат считается приемлемым при снижении КОЕ в течение времени хранения (от нулевого до
24 или 48 ч) не более чем на 3 lg [(1 * 103) ± 10 %].
14