ГОСТ Р 70393—2022
При вскрытии емкости с питательной средой указывают соответствующую дату и допустимый срок
хранения, если он отличается от срока годности среды.
Любую среду в готовом к применению виде со следами нарушения целостности (трещин) на упа
ковке, с признаками микробного роста (наличие колоний, газообразования, изменения цвета, мутности и
др.) использовать не допускается.
4.5.3 Требование к воде, используемой для приготовления питательных сред
При приготовлении питательных сред используют только воду, которая подвергалась предвари
тельной очистке — дистиллированную, деминерализованную, деионизированную, обработанную путем
обратного осмоса либо эквивалентного качества, не содержащую веществ, которые могут ингибиро
вать или иным способом повлиять на рост микроорганизмов в условиях испытания (например, следы
хлора, аммиака или ионов металлов).
Очищенную воду хранят в герметично упакованных емкостях из инертного материала (нейтраль
ное стекло, полиэтилен и т. п.), который не содержит ингибирующих веществ.
Микробное загрязнение не должно превышать 103 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл (см3),
но предпочтительнее — менее 102 КОЕ/мл. Микробное загрязнение следует регулярно контролировать
в соответствии с ГОСТ ISO 6222.
Примечание — Вода, которая была пропущена через ионообменник (деминерализованная), может со
держать весьма значительное количество микроорганизмов. Таким образом, не рекомендуется использовать дан
ный процесс без проверки воды на микробное загрязнение. Для поиска наилучшего способа минимизации микроб ного
загрязнения следует проконсультироваться с производителем. Деминерализованная вода с высоким уровнем
загрязнения, даже стерилизованная путем фильтрации, все еще может содержать вещества, подавляющие рост
определенных микроорганизмов.
Электропроводность воды, используемой в лаборатории, должна быть не более 25 мкСм/см (что
эквивалентно сопротивлению 0,4 МОм см), но предпочтительно использовать воду с электропровод
ностью ниже 5,1 мкСм/см (по ГОСТ Р 58144 при температуре 25 °С), если не требуется иное. Электро
проводность воды следует проверять перед использованием.
4.5.4 Процессы взвешивания и растворения
Соблюдая необходимые меры предосторожности, аккуратно взвешивают требуемое количество
сухой среды или ингредиентов и постепенно смешивают с необходимым количеством воды, избегая
образования комков.
Требуемое количество сухой среды для приготовления 1 дм3 (л) указано на этикетке изделия. Для
приготовления необходимого объема среды, отличающегося от 1 дм3 (л) и составляющего не менее 0,1
дм3 (л), требуемое количество среды вычисляют пропорционально рекомендованному произво
дителем.
Влажность в помещении, где проводят взвешивание, не должна превышать 60 % [2].
Если необходимо, для растворения сухих сред или отдельных ингредиентов используют периоди
ческое или постоянное перемешивание с последующим нагреванием, при этом следует избегать пере
грева. Средам, содержащим агар, перед нагреванием необходимо дать несколько минут на набухание, и
затем их при необходимости фильтруют и стерилизуют.
4.5.5 Измерение и регулирование pH МИ ИВД
pH измеряют с помощью pH-метра и корректируют перед стерилизацией, если необходимо, так,
чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25 °С среда имела требуемое значение pH
±0,2 ед. pH, если иные указания отсутствуют. Дополнительная информация об измерениях pH приведе на
в ГОСТ ISO 7218 и [3].
4.5.6 Стерилизация МИ ИВД
Среду перед стерилизацией разливают по соответствующим емкостям, при этом оставляют до
статочное свободное пространство над средой во избежание выкипания среды в процессе охлаждения
после тепловой обработки при автоклавировании либо перелива среды после внесения добавок.
Стерилизацию питательных сред и добавок, как правило, проводят насыщенным водяным паром
под давлением. Для сред, содержащих термолабильные компоненты, или для термолабильных компо
нентов используют стерилизующую фильтрацию или кипячение [3].
После стерилизации агаризованные среды охлаждают до температуры 45 °С — 50 °С и разливают
в асептических условиях в чашки Петри так, чтобы получить слой необходимой толщины, но не менее
3 мм. При хранении чашек, или при инкубировании более 72 ч, или при температуре инкубирования
выше 40 °С может потребоваться больший объем питательной среды до толщины слоя 4—5 мм. После
6