ГОСТ Р 70354—2022
В.3.2.2.2 Раствор ацетата таллия
Состав:
ацетат таллия250 мг
дистиллированная вода100 см3
Приготовление:
Ацетат таллия растворяют вдистиллированной воде и стерилизуют фильтрованием.
Предупреждение — Ацетат таллия очень токсичен. Необходимо принимать все меры предосторожности при
использовании ацетата таллия и его раствора для предотвращения загрязнения оператора и окружающей среды.
В.3.2.3 Готовая среда
Состав среды:
основа среды (см. Г.3.2.1)900 см3
раствор сульфата стрептомицина (см. Г.3.2.2.1) 50 см3
раствор ацетата таллия (см. Г.3.2.2.2) 20 см3
Приготовление:
В расплавленную и охлажденную на водяной бане до температуры 47 °С основу питательной среды добав
ляют растворы селективных добавок (растворы также нагревают в стерильных условиях до температуры 47 °С) и
тщательно перемешивают.
В стерильные чашки Петри разливают готовую среду по 15—20 см3и дают агару затвердеть.
Непосредственно перед использованием среда в чашках должна быть подсушена поверхностью агара вниз
без крышки в термостате при температуре от 25 °С до 50 °С.
Допускается хранение среды в чашках Петри при температуре (5 ± 3) °С в течение 7 сут.
В.3.3 Реактив для оксидазного теста
В качестве реактива для оксидазного теста используют М,М,1М’,М’-тетраметил-п-фенилендиамин дигидро
хлорид.
1,0 г тетраметил-п-фенилендиамин дигидрохлорида растворяют в 100 см3 холодной дистиллированной
воды.
Реактив готовят непосредственно перед использованием.
Допускается использовать коммерческие диски или полоски в соответствии с рекомендациями производи
теля.
В.3.4 Реактив для каталазного теста
В качестве реактива для каталазного теста используют раствор с объемной долей перекиси водорода 3 %.
Раствор готовят по ГОСТ 10444.1.
Раствор хранят при температуре от 20 °С до 30 °С вдали от прямого света.
В.4 Проведение испытаний
В.4.1 Посев и инкубация
С помощью стерильной пипетки переносят 0,1 см3исходной суспензии или десятикратных разведений на по
верхность питательного агара STAA. Если для посева используют только исходную суспензию, посев необходимо
производить на две параллельные чашки. Жидкость по поверхности агара распределяют шпателем, не касаясь
стенок чашки. Для каждой чашки используют стерильный шпатель. Для лучшего впитывания жидкости чашки с за
крытыми крышками оставляют на 15 мин при температуре окружающей среды на столе.
Чашки инкубируют в течение (48 ± 4) ч в термостате при температуре от 22 °С до 25 °С.
В.4.2 Подсчет колоний
После окончания термостатирования на каждой чашке, содержащей от 10 до 150 колоний, подсчитывают
характерные колонии. Характерные колонии представляют собой блестящие, круглые колонии диаметром 1 мм
или более, имеющие не совсем белый цвет.
В.4.3 Подтверждение
Для подтверждения принадлежности выделенной культуры к бактериям Brochothrix spp. выбирают 5 колоний
из каждой чашки Петри и проводят для каждой колонии оксидазный и каталазный тесты.
В.4.3.1 Оксидазный тест
На кружок фильтровальной бумаги, смоченный реактивом тетраметил-п-фенилендиамин дигидрохлоридом
для определения оксидазной активности, с помощью бактериальной петли (никелево-хромовая проволока дает
ложноположительные результаты) переносят колонию бактериальной культуры, полученной на среде STAA. Ок-
16