ГОСТ Р 70354—2022
Приложение В
(справочное)
Метод выявления и подсчета количества бактерий Brochothrix spp.
В.1 Сущность метода
Метод основан на высеве определенного количества ряда десятикратных разведений или исходной суспен
зии исследуемого образца на плотную селективную питательную среду в чашках Петри, инкубация чашек при
температуре от 22 °С до 25 °С в течение 48 ч, исследовании колоний по подтверждающим тестам и подсчете коли
чества Brochothrix spp. на грамм образца с учетом разведений.
В.2 Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытаний применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими
дополнениями:
глицерин;
магний сернокислый 7-водный по ГОСТ 2493;
стрептомицина сульфат;
таллия ацетат;
М,1Ч,М’,М’-тетраметил-п-фенилендиамин дигидрохлорид.
В.З Приготовление образцов для испытания, разведений, питательных сред и реактивов
В.3.1 Подготовку образцов для испытания, исходной суспензии и десятикратных разведений проводят
по ГОСТ ISO 6887-1 и ГОСТ Р ИСО 6887-2.
Подготовку и тестирование питательных сред проводят по ГОСТ ISO 11133.
Приготовление питательных сред или реактивов из обезвоженных полных сред или реактивов, а также гото
вых к использованию сред или реактивов осуществляют в соответствии с инструкциями производителя.
В.3.2 Приготовление плотной селективной среды: агар с сульфатом стрептомицина и ацетатом
таллия (STAA)
В.3.2.1 Основа питательной среды
Если в исследуемом образце предполагается большое содержание дрожжей и плесневых грибов, желатель
но в состав питательной среды ввести амфотерицин В (10 мкг/см3).
Состав:
пептон20,0 г
дрожжевой экстракт2,0 г
глицерин15,0 г
калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НР04)1.0 г
магний сернокислый 7-водный (MgS04-7H20)1.0 г
агар9—18 г
дистиллированная вода900 см3
Приготовление:
Компоненты или сухую готовую питательную среду растворяют при нагревании вдистиллированной воде.
Устанавливают pH средытаким образом, чтобы после стерилизации егозначение составляло (7,0±0,2) ед. pH
при температуре 25 °С.
Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.
После стерилизации добавляют селективные добавки.
В.3.2.2 Растворы селективных добавок
В.З.2.2.1 Раствор сульфата стрептомицина
Состав:
Приготовление:
Сульфат стрептомицина растворяют вдистиллированной воде и стерилизуют фильтрованием.
В зависимости от прочности геля агара.
сульфат стрептомицина1,0 г
дистиллированная вода100 см3
15