ГОСТ ISO 21149—2013
13 Нейтрализация антимикробных свойств продукции
13.1 Общие положения
Описанные ниже процедуры демонстрируют, что микроорганизмы могут расти в условиях прове
дения анализа.
Два штамма (см. раздел 7). используемые для подтверждения этих свойств, обычно чувствитель
ны к антимикробным агентам.
13.2 Приготовление инокулята
Перед проведением испытаний (для каждого штамма) засевают поверхность агаризованной сре
ды. содержащей соево-казеиновый гидрализат (SCDA), или другой соответствующей (неселективной,
ненейтрализирующей) среды. Инкубируют при температуре (32.5 ± 2.5) °С в течение 18-24 ч. Кончи
ком стерильной петли отбирают часть культуры и ресуспендируют ее в разбавителе для приготовле
ния бактериальных суспензий (5.3), чтобы получить калиброванную суспензию с количеством клеток
около 1 • 10а КОЕ/см3 (например, количество клеток можно измерить, используя спектрофотометр, по
ISO 21148 (приложение С)]. Используют данную суспензию и ее разведения в течение 2 ч.
13.3 Валидация метода глубинного посева
13.3.1 Сущность метода
Для каждого штамма смешивают нейтрализованную пробу (исходную суспензию или ее разведение в
соответствиис антимикробной активностью или низкой растворимостьюпродукции) с разведениемкультуры
микроорганизма. Высевают на чашку Петриилифильтруютчерез мембранный фильтр. После инкубирования
проверяютморфологию колоний и сравнивают полученное число колоний с контрольным (без пробы).
Если количество микроорганизмов составляет менее 50 % (0.3 log) от количества в контрольной
пробе, модифицируют методику (используя другие разбавители, средства для нейтрализации или соче
тания того идругого, см. приложение D). Необходимо принимать во внимание изменчивость, свойствен
ную для чашечного метода подсчета. Два результата должны рассматриваться как различные, только
если разность превышает 50 %, или. будучи выражена логарифмически, превышает 0.3. Отсутствие
роста инокулята делает испытание недействительным, если только не учитывать контаминацию про
дукции этим микроорганизмом как маловероятную.
13.3.2 Валидация глубинного метода посева
Смешивают 9 см3 исходной суспензии и/или ее разведения (разведений) в нейтрализирующем
разбавителе (или в другом, см. 5.2) с 1 см3 суспензии микроорганизмов, содержащих от 1000 до 3000
КОЕ/см3. Переносят 1 см3 в чашку Петри (предпочтительно в две параллельные чашки) и заливают
15-20 см3расплавленной агаризованной среды (5.4.2). выдержанной на водяной бане при температу ре
не выше чем 48 ’С. Параллельно приготавливают и делают контрольный посев, используя тот же
самый разбавитель и ту же самую суспензию микроорганизмов, но без пробы.
После инкубации в течение 24-72 ч при температуре (32,5 ± 2.5) ’С подсчитывают колонии на
чашках и сравнивают с результатами, полученными при испытании, и результатами контрольного испы
тания. Разбавитель и метод подсчета считают подходящими при разведении 1 :10 (когда используется 1
см3 исходной суспензии), если количество микроорганизмов составляет не менее 50 % (0.3 log) от
количества микроорганизмов в контрольном посеве.
13.3.3 Валидация поверхностного мотода посева
Смешивают 9 см3 исходной суспензии и/или ее разведения (разведений) в нейтрализирующем
разбавителе (или в другом, см. 5.1) с 1 см3 суспензии микроорганизмов, содержащих от 10000 до
30000 КОЕ/см3 клеток (или менее, если распределяют 0.5 см3 или 1 см3). Распределяют не менее 0.1
см3 по поверхности твердой агаризованной среды (5.4.2) (предпочтительно в две параллельные
чашки). Параллельно приготавливают и делают контрольный посев, используя тот же самый разбави
тель и ту же самую суспензию микроорганизмов, но без пробы.
После инкубации в течение 24-72 ч при температуре (32,5 ± 2.5) °С подсчитывают колонии на
чашках и сравнивают с результатами, полученными при испытании, и результатами контрольного испы
тания. Разбавитель и метод подсчета считают действительными при разведении 1 :10 (когда использу
ется 1 см3 исходной суспензии), если количество микроорганизмов составляет не менее 50 % (0.3 log) от
количества микроорганизмов в контрольном посеве.
Ю