ГОСТ ISO 21148—2013
Приложение С
(справочное)
Приготовление и калибровка суспензий
С.1 Культуры эталонных штаммов
Чтобы улучшить повторяемость и воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать третью
(по крайней мере вторую) субкультуру, выращенную на агаризованной среде, полученную от культур, хранимых
и приготовленных согласно (4J. для приготовления посевного материала бактерий. При использовании Е. coli.
Р. aeruginosa. S. aureus субкультуры активируют в течение 18—24 ч. При использовании С. albicans пригодна пер
вая или вторая субкультура, выращенная в течение 36—48 ч.
С.2 Приготовление клеточных суспензий
Берут 10 см3 разбавителя и вносят в стерильную колбу вместимостью 100 см3, содержащую 5 г стеклянных
бусинок. Петлей переносят клетки, выращенные на агаризованной среде, в разбавитель. Клетки должны быть ре-
суспендированы в разбавителе путем погружения петли и трения ее о стенку колбы с целью перемещения клеток в
жидкость. Встряхивают колбу в течение 2—3 мин. (используя, если возможно, механическую мешалку). Удаляют
верхнюю часть суспензии (избегая любого контакта со стеклянными бусинками) и переносят полученную суспен
зию в стерильную колбу (пробирку).
С.З Калибровка суспензий
Регулируют ^мсло клеток в суспензии до значений МО8— 3-103 КОЕ/см3 (для С. albicans 1-107— 3-107 КОБ’см3)
с использованием разбавителя и в соответствии с данными калибровки, полученными в лаборатории. Например,
используют спектрофотометр [длина волны (620
±
20) нм] и разовую кювету с длиной оптического пути 10 мм. Из
меряют оптическую плотность суспензии и при необходимости разбавляют ее. чтобы довести плотность до опре
деленного значения. Соответствующие значения оптической плотности были получены между 0.150 и 0.460 в за
висимости от вида штаммов.
16