ГОСТ ISO 21148—2013
А.З Тест на каталазу
А.3.1 Общие положения
Обнаружение этого фермента, который разлагает перекись водорода (Н20 2) на воду и кислород, может быть
проведено с помощью бульонной культуры, культуры, выросшей на агаризованной среде или одной-единственной
колонии, взятой с поверхности агаризованной среды.
А.3.2 Из бульонной культуры
К 1см3 бульонной культуры добавляют 0.5 см3 десятикратного по объему (3 %) раствора перекиси водорода.
Отмечают появление пузырьков кислорода (каталазоположительные) или их отсутствие (каталаэоотрицательные).
А.3.3 С поверхности агаризованной питательной среды
Наливают на культуру 1—2 см3десятикратного по объему (3 %) раствора перекиси водорода.
Наблюдают сразу же и по истечении 5 мин., независимо от того, образовались пузырьки кислорода или нет.
А.3.4 Из колонии
Наносят раздельно две капли десятикратного по объему раствора перекиси водорода на предметное стекло.
Отбирают колонию с помощью стерильной стеклянной или пластиковой палочки (но только не металличе
ской иглой) и осторожно эмульгируют ее в одну из этих двух капель. Наблюдают сразу же и через несколько минут (не
менее 1мин.), образовались пузырьки кислорода или нет. В случае сомнении покрывают каждую каплю покров ным
стеклом и сравнивают возникновение пузырьков под обоими покрывными стеклами.
Наблюдение можно проводить визуально или с помощью микроскопа с малым увеличением.
А.4 Тест на оксидазу
А.4.1 Общее
Наличие оксидазы обнаруживают по изменению цвета соединения во время окисления под действием дан
ного фермента.
А.4.2 Реактив
А.4.2.1 Состав
- N.N.N’.N -тетраметил-З-пара-фенилендиаминдигидрохлорид (C10HieN2-2HCI) 1,0:
- вода 100 см3.
А.4.2.2 Приготовление
Растворяют реактив в холодной воде. Готовят реактив непосредственно перед его использованием.
Можно использовать доступные, имеющиеся в продаже диски или полоски. В этом случае следуют рекомен
дациям изготовителя.
А.4.2.3 Метод
Увлажняют фильтровальную бумагу реактивом. Берут часть бактериальной культуры с агаризованной среды
с помощью платиновой иглы или стеклянной или пластиковой палочки (никель-хромовая игла дает ложноположи-
тельный результат) и наносят ее на смоченную фильтровальную бумагу.
А.4.2.4 Интерпретация полученного результата
В случае наличия оксидазы появляется фиолетово-пурпурный цвет в течение 5—10 с. Если цвет не изменил
ся в течение 10 с. тест рассматривается как отрицательный.
А.5 Использование биохимических тестов для идентификации
Для идентификации могут использоваться существующие в настоящее время биохимические тесты. Вместе
с тем все имеющиеся в продаже тесты не обеспечивают одинаковый уровень надежности. Их рабочие характери
стики необходимо оценивать перед использованием, если они не были подтверждены изготовителем и/или неза
висимой организацией.
14