ГОСТ 33491—2015
7.17.5.5Готовят два ряда питательных сред, каждый по три пробирки, содержащих среду
Блаурокка или другую питательную среду в количестве 10 см3 для высева в них соответствующих
разведений анализируемого продукта. Перед употреблением питательную среду разогревают на
кипящей водяной бане в течение 15 мин для снижения в ней содержания растворенного кислорода.
При использовании плотных питательных сред перед проведением анализа их разогревают в
кипящей водяной бане до полного расплавления агара. По окончании тепловой обработки среду
охлаждают до температуры 40 гС - 45 °С.
7.17.6 Проведение анализа
7.17.6.1 Засев среды проводят соответствующим разведением посевного материала пипеткой.
Посевной материал при этом должен свободно стекать из пипетки без принудительного выдувания.
Внесение посевного материала в питательную среду начинают с последнего разведения, внося
в последнюю пробирку каждого из 2 рядов среды по 1 см3разведения продукта 1 10"7, затем таким же
образом вносят по 1 см3 разведения продукта 1-10"®, 1•10-5. Первая пробирка каждого ряда
будет содержать разведение продукта 1-10**, а последняя — М О ’7. При внесении разведений
продукта в питательную среду проводят тщательное перемешивание пипеткой, избегая
попадания в нее воздуха, а затем круговыми вращениями руки или с помощью шуттель-
аппарата, имитирующими центрифугирование.
Для каждого посева используют новую стерильную пипетку.
Для инкубации пробирки с посевами анализируемых проб выдерживают в термостате с
температурой (37 ± 1) °С в течение 3-5 сут.
7.17.7 Обработка результатов
7.17.7.1 Подтверждение наличия бифидобактерии в среде Блаурокка осуществляют методом
микросколирования.
Для этого из 1-10 7. М 0 ’£ и М О ’5 разведений продукта в питательной среде после инкубации
готовят микроскопические препараты, окрашенные по Граму или метиленовым голубым. Перед
приготовлением микроскопических препаратов пробирки с микробиальным ростом тщательно
перемешивают пипеткой или с помощью шуттель-аппарата до получения однородной смеси.
При приготовлении микроскопического препарата на чистое предметное стекло наносят
бактериологической петлей материал из колонии или небольшую каплю предварительно
суспендированного анализируемого материала и распределяют его на площади около 1 см2.
Препарат высушивают при комнатной температуре, фиксируют на пламени горелки. Окрашивают по
Граму или красят метиленовым голубым. Бифидобактерии окрашиваются по Граму положительно. В
мазках имеют вид тонких прямых или слегка изогнутых палочек с бифуркацией на одном или обоих
концах, или без нее. Располагаются группами в виде снежинок, английской буквы V или скоплений в
виде иероглифов. Иногда могут иметь вид тонких мелкозернистых палочек.
Поскольку анализируемые продукты являются кисломолочными, в мазках в зависимости от
вида продукта присутствуют заквасочные микроорганизмы (молочнокислые стрептококки и палочки),
а также могут присутствовать клетки дрожжей.
Содержание бифидобактерий в анализируемом продукте определяется по наличию
бифидобактерий в анализируемом разведении продукта методом микросколирования. Так. если
бифидобактерии обнаружены в М О ’7 и более низком разведении продукта, то считают, что
содержание бифидобактерий в продукте составляет М О 7КОЕ/г. если бифидобактерии обнаружены в
1Ю * и более низком разведении продукта, то считают что содержание бифидобактерий в продукте
составляет 1-10еКОDr.
7.17.7.2 При использовании питательной среды ОББ по окончании культивирования учитывают
пробирки, в которых выросли типичные для бифидобактерий колонии — в виде крупных «дисков» или
«гречишных зерен». Размер колоний определяется их количеством: чем меньше колоний в пробирке со
средой, тем они крупнее.
Отмечают разведение и подсчитывают количество выросших типичных колоний.
При необходимости подтверждение принадлежности образовавшихся типичных колоний к
бифидобактериям проводят методом микросколирования в соответствии с ГОСТ 32901.
Количество бифидобактерий N, КОЕ в 1 см3продукта, вычисляют по формуле
N = cA/d,
(
1
)
гдес — количество колоний, подсчитанных в пробирке;
V— объем посевного материала, см3;
в среде ОББ с неомицином
d — выбранное разведение (коэффициент разбавления).
Для определения фактического количества бифидобактерий
полученный результат удваивают.
15