ГОСТ 33491—2015
Среды питательные сухие для выращивания бифидобактерий по техническим документам,
разрешенным к применению в установленном порядке.
Экстракт кукурузы сгущенный по техническим документам, разрешенным к применению в
установленном порядке.
Этиловый спирт ректификованный технический по ГОСТ 18300. нормативным или техническим
документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и
вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже вышеуказанных.
Все используемые реактивы должны иметь квалификацию «химически чистый» или «чистый
для анализа».
7.17.2 Подготовка посуды и материалов — по ГОСТ 32901.
7.17.3 Приготовление растворов, питательных сред и реактивов
7.17.3.1 Приготовление раствора хлористого натрия — по ГОСТ 32901.
7.17.3.2 Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб по
ГОСТ 32901.
7.17.3.3 Приготовление реактива из метиленового голубого 10 г метиленового голубого
смешивают со 100 см3 96 %-ного этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37
1 1) °С на (24 ± 1) ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре.
Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре
(371 1) °С — не более 3 мес при условии герметической укупорки.
7.17.3.4 Приготовление рабочего раствора из метиленового голубого — по ГОСТ 32901.
7.17.3.5 Приготовление раствора из метиленового голубого для окраски препаратов — по
ГОСТ 32901.
7.17.3.6 Приготовление реактивов для окраски по Граму (модификация Г.П. Калины) — по
ГОСТ 32901.
7.17.3.7 Приготовление модифицированной печеночной среды Блаурокка
Свежую говяжью печень количеством 0.5 кг очищают от пленок и протоков, измельчают,
заливают 1дм3 дистиллированной воды и кипятят в течение 1,5-2 ч. Отвар профильтровывают,
доводят до 1 дм3дистиллированной водой. Добавляют на 1 дм3 раствора: хлористого натрия — 5,0 г,
пептона — 10,0 г. Устанавливают активную кислотность (8,15
а
0,05) ед. pH с помощью 10 %-ного
раствора гидроокиси натрия. Кипятят 10 мин. Стерилизуют при температуре (121
1
3) °С в течение
(151 1) мин или при температуре (112 ± 5)’С в течение (30 1 1) мин. На следующий день
печеночный бульон сливают, освободив от осадка, доливают дистиллированной водой до 1 дм3.
Вносят на 1 дм3 бульона: глюкозу — 5,0 г, агар — 0.8 г, цистеин - 0,3 г. Кипятят 10 мин. доводят
кислотность до (7,7 1 0,1) ед. pH. Разливают в пробирки по 10 см: и стерилизуют при температуре
(121 1 3) “С втечение (15 ± 1) мин или при температуре (112
а
5) °С — в течение (20
а
1) мин.
Среду проверяют на стерильность путем выдержки при температуре (37
а
1) °С в течение 2 сут.
Срок хранения среды при температуре (20
а
2) X — не более одного месяца и при
температуре (4 ±
2)
°С — не более 2 мес.
Ростовые качества каждой серии среды Блаурокка контролируют высевом лиофилизированной
биомассы бифидобактерий; при этом рост бифидобактерий должен проявиться не позднее, чем через
48 ч при температуре (37
а
1) 5С.
7.17.3.8 Приготовление кукурузно-лактозной среды (плотной)
В небольшом объеме дистиллированной воды расплавляют 2.5 г агара из расчета на 1 дм3
приготовляемой среды. К остальному объему дистиллированной воды добавляют 10 г пептона,
40 см3 водного раствора кукурузного экстракта, разбавленного дистиллированной водой
в соотношении 1 :2, 6.6 г трехзамещенного лимоннокислого натрия, 0.12 г сернокислого магния.
2 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Смесь нагревают до температуры (80
а
2)
еС, после
чего соединяют с расплавленным агаром, добавляют 10 г лактозы и 0.15 г солянокислого
цистеина или 0.5 г аскорбиновой кислоты. Цистеин предварительно растворяют в
небольшом количестве дистиллированной воды, в которой устанавливают (8,45 А 0,05) ед.
pH с помощью 10 %-ного раствора гцдроксида натрия и нагревают на водяной бане до
полного растворения. Всю смесь доливаютгорячей
дистиллированной водой до заданного объема (1 дм3)и устанавливают
(7,05 А0.05) ед. pH с помощью 40 %-ного раствора гидроксида натрия.
Среду разливают в пробирки по 10 или 20 см3 и стерилизуют при температуре (112 А 5) X в
течение (30
а
1) мин.
Кукурузно-лактозную среду для выращивания бактерий готовят из сухого концентрата (ГМК-1)
следующим образом: 50 г концентрата вносят в 1000 см3 дистиллированной воды, нагревают до
13