ГОСТ Р 56139—2014
При необходимости после инокуляции для создания анаэробных условий в лунки вносят сте
рильное вазелиновое масло, полностью закрывая внесенную суспензию бактериальных клеток.
После инокуляции планшет накрывают крышкой и инкубируют 5-24 ч при оптимальной темпера
туре и атмосфере для анализируемого вида микроорганизмов.
По окончании инкубации результаты учитывают визуально, отмечая цвет каждой лунки, и зано
сят в прилагаемые бланки. При необходимости вносят реактивы для проявления анализируемого
признака. Учет результатов на бета-галактозидазу проводят дважды: через 3-5 ч и через 18-24 ч.
Интерпретацию результатов для определения родовой и видовой принадлежности анализируе
мого штамма проводят с помощью таблиц, книг-каталогов кодов, компьютерного обеспечения соот
ветствующих фирм изготовителей.
9.5.3 При получении вариабельных результатов тестов идентификации необходимо проверить
стабильность биохимических свойств пробиотических микроорганизмов методом пассирования мик
роорганизма на жидких и плотных питательных средах (3-5 пассажей) и дальнейшим трехкратным
тестированием на тест-панелях. Трехкратное совпадение всех исследованных биохимических реак
ций. выявленное после пассирования культур, будет свидетельствовать о стабильности фенотипиче
ских признаков, как указано в [7]. [8].
Вариабельность результатов свидетельствует о нестабильности фенотипических признаков у
пробиотического микроорганизма.
9.5.4 Для ориентировочной идентификации видовой принадлежности бифидобактерий допуска
ется применение тест-систем промышленного изготовления. Для тестирования бифидобактерий
предпочтительно использовать параллельно не менее двух наборов тест-панелей по 5.3. Фермента
тивные свойства бифидобактерий, наиболее часто используемых при производстве функциональных
пищевых продуктов (б.
bifidum, B.longum. В. breve
.
В. infantis. В. adolescentis. В. animalis
), приведены в
приложении Б.
10 Обработка результатов
10.1 Окончательный подсчет числа КОЕ или количества клеток пробиотических микроорганиз
мов в 1.0 см3(г) анализируемого функционального пищевого продукта проводят после подтверждения
принадлежности выросших колоний к искомому виду пробиотических микроорганизмов на основе изу
чения культуральных, морфологических и биохимических свойств.
10.2 Подсчет количества пробиотических микроорганизмов, выросших на плотных агари-
зованных средах на чашках Петри
Подсчитывают количество характерных колоний на каждой чашке Петри. Для подсчета исполь
зуют чашки, на которых выросло от 10 до 300 колоний. Выросшие колонии пробиотических микроор
ганизмов просматривают в проходящем свете. Для ускорения подсчета можно использовать специ
альное оборудование для подсчета колоний.
Подсчет производят путем умножения числа выросших колоний на чашке на соответствующее
разведение. При поверхностном посеве дополнительно учитывают объем инокулята, внесенный на
чашку, используя коэффициент *5 (коэффициент пересчета на 1 см3 суспензии при посеве 0,2 см3).
При глубинном посеве коэффициент *5 при расчете не применяют.
Количество
N
пробиотических микроорганизмов при подсчете на двух параллельных чашках
Петри. КОЕ/см3(г). вычисляют по формуле
N
С к
(л, +0.1 л2
) d
(D
где С — сумма колоний микроорганизма, подсчитанных на соответствующих чашках;
к —
коэффициент пересчета на 1 см3 разведения суспензии, при посеве 0.2 см3на чашку
к
= 5:
л, — количество чашек, подсчитанных в самом низком разведении;
гь
— количество чашек, подсчитанных в самом высоком разведении;
d
— величина самого низкого разведения, взятого для подсчета (например, при проведении
подсчета в шестом и седьмом разведениях,
d =
10 б).
17