ГОСТ Р 56139—2014
6.3.4 Приготовление питательных сред для культивирования бактерий рода
Lactococcus
и вида
Streptococcus thermophilus
6.3.4.1 Приготовление среды Ли (Lee)
Среду готовят по ГОСТ 10444.11.
6.3.4.2 Приготовление питательной среды М-17
а) Основа среды
В 950 см3дистиллированной воды на кипящей водяной бане растворяют 2.5 г триптического пе
ревара казеина (триптона), 2.5 г пептического перевара мяса (пептона). 5,0 г перевара папаинового сои
(пептона соевого). 2.5 г дрожжевого экстракта, 5,0 г мясного экстракта. 19,0 г глицерофосфата натрия
(C3H;-06PNa2), 0.25 г сернокислого магния (MgS04 7Н20). 0.5 г аскорбиновой кислоты. 9-18 г агара,
охлаждают на другой водяной бане до 50 °С. Устанавливают активную кислотность среды та ким
образом, чтобы после стерилизации при 25 еС pH был в пределах (6,8 ± 0.1) ед. pH при посеве на
Lactococcus spp.
или (7.2 ± 0,1) ед. pH — при посеве на
Streptococcus thermophilus.
Готовую среду
разливают в лабораторную посуду соответствующей вместимости по 95 см3. Стерилизуют в автокла ве
при (121 ± 1) °С в течение (15 ± 1) мин.
б) Раствор лактозы
10,0 г лактозы растворяют в 100.0 см3 дистиллированной воды, стерилизуют в автоклаве при
(121 ± 1) °С в течение 15 мин.
в) Приготовление среды
Непосредственно перед использованием расплавляют 95 см3основной среды в водяной бане и
быстро охлаждают до 48 °С — 50 °С. Подогревают 5 см3раствора лактозы до 48 °С — 50 °С. Добав
ляют раствор лактозы к основной среде и перемешивают.
6.3.5Приготовлениепитательныхсреддлякультивированиябактерийрода
Propionibacterium
6.3.5.1 Плотная кукурузно-лактозная среда готовится по ГОСТ Р 52687.
6.3.5.2 Агаризованная питательная среда для определения пропиоиовокислых бактерий
В (1000 ± 50) см3воды вносят 30 г пептона. 1 г дрожжевого автолизата. 20 г агара. Смесь тща
тельно перемешивают, затем нагревают и кипятят до расплавления агара, не допуская пригорания.
Добавляют 20 см3 40 %-ного раствора молочной кислоты. В полученной среде проверяют активную
кислотность и доводят ее раствором гидроокиси натрия до значения (7.1 ± 0.1) ед. pH. Среду пере
мешивают, разливают в пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ±
2) °С в автоклаве в течение (15 ± 1) мин.
6.4 Подготовка питательных сред перед использованием
6.4.1 Питательные среды расплавляют на кипящей водяной бане или другим способом, который
дает аналогичный результат (например, текучим паром в автоклаве), избегая перегревания среды,
для чего прекращают нагрев сразу же после расплавления. Перед использованием питательную сре
ду содержат в расплавленном состоянии на водяной бане с терморегулятором при температуре (47 ±
2) °С.
Сохраняют расплавленную питательную среду не более 6 ч. Неиспользованную полностью сре
ду после ее затвердения не применяют.
6.4.2 При необходимости регенерации (деаэрирования для снижения растворенного кислорода)
питательных сред, фосфатно-тиогликолевого буферного раствора и других растворов их прогревают
непосредственно перед использованием в течение 20 мин на кипящей водяной бане. Далее пробирки
или флаконы с растворами охлаждают в водяной бане до температуры (45 ± 2) °С.
6.4.3 Агаризованные питательные среды разливают в чашки Петри с толщиной слоя питатель
ной среды не менее 2 мм и после застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с
поверхности среды чашки переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин в термоста
те при температуре 48 °С — 50 °С. Приготовленные таким образом чашки Петри накрывают
крышка ми и используют немедленно или хранят при условиях, предупреждающих изменение их
состава, т. е. в темноте и в холодильнике в течение рабочего дня.
6.5 Приготовление растворов и реактивов для анализа
6.5.1 Стерильная дистиллированная вода
Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стери
лизуют в автоклаве в течение (20 ± 1) мин при (121 ±1) °С.
9