ГОСТ Р 56139—2014
6.3.3.2 Среды селективные для определения количества бифидобактерий в продуктах со сме
шанной технологической микрофлорой
а) В качестве селективного агента для ингибиции роста сопутствующих биотехнологических
микроорганизмов используют добавки антибиотиков и редуцирующие агенты, снижающие окисли
тельно-восстановительный потенциал питательной среды.
б) TOS-MUP агар (TOS пропионатный агар с мупироцином лития)
Среду готовят по ГОСТ ISO 29981.
в) Питательная среда МРС (MRS) с диклоксациллином
- Приготовление раствора селективного агента
25 мг диклоксациллина растворяют в 50 см3дистиллированной воды, затем полученный раствор
стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 при использовании мембранных фильтров с размером пор
0,2 мкм. срок хранения раствора — 15 сут при температуре 4 X .
Допускается готовить раствор диклоксациллина без фильтрации с соблюдением правил асепти
ки. при этом диклоксациллин в асептических условиях растворяют в стерильной дистиллированной
воде.
Непосредственно перед использованием готовят рабочее разведение этого раствора 1:10.
- Приготовление антиоксидантного раствора
Растворяют 3 г L-цистеина гидрохлорида в 100 см3дистиллированной воды, затем полученный
раствор стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 при использовании мембранных фильтров с раз
мером пор 0,2 мкм. Раствор разливают по 10 см3 в стерильные пробирки. Хранят раствор 15 сут при
температуре 4 °С.
Допускается готовить раствор L-цистеина без фильтрации с соблюдением правил асептики, при
этом в асептических условиях растворяют L-цистеин гидрохлорид в стерильной дистиллированной
воде.
- Приготовление питательной среды МРС (MRS)
Среду готовят no 6.3.2.1 и разливают в бутылки или флаконы по 100 см3.
Перед использованием среду расплавляют и выдерживают в кипящей водяной бане в течение
20 мин для регенерации среды. Затем среду охлаждают до температуры 40 X — 45 X , после чего
вносят на каждые 100 см3 среды по 1 см3 раствора селективного агента и 1 см3 раствора антиокси
данта. Смесь аккуратно перемешивают, не допуская насыщения среды воздухом.
6.3.3.3 Среды неселективные для культивирования изолятов бифидобактерий
а) Гидролизатно-молочная среда
Среду готовят в два этапа.
• Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят в течение (2 ± 1) мин и охла
ждают до температуры (45 ± 2) X . Доводят активную кислотность до pH (7.7 ± 0,1). добавляя водный
раствор гидроокиси натрия. К 1000 см3молока добавляют 1.0 г порошка панкреатина. Затем к молоку
добавляют от 5 до 6 см3хлороформа. Колбу закрывают корковой пробкой и выдерживают при темпе
ратуре (40 ± 2) X в течение 18-24 ч. В течение первых 3-5 ч молоко 2-3 раза перемешивают (пробку
после перемешивания приоткрывают для удаления хлороформа).
Затем гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллирован
ной водой в соотношении 1:1. устанавливают активную кислотность pH (7,1 ±0,1), добавляя водный
раствор гидроокиси натрия. В случае хранения гидролизованное молоко стерилизуют в автоклаве при
температуре (121 ± 1) X в течение 15 мин.
- Приготовление гидролизатно-молочной среды
В небольшом количестве разведенного гидролизата молока расплавляют агар в количестве 2.5
г на 1000 см3приготовляемой среды. К остальному количеству гидролизата добавляют 20 г пептона и
3.5 г хлористого натрия, смесь нагревают до температуры (80 ± 2) X , после чего соединяют с рас
плавленным агаром. В смеси устанавливают активную кислотность (7.4 ± 0.1) ед. pH. кипятят в тече
ние (15 ± 1) мин. дают отстояться, сливают с осадка, не фильтруя, доливают горячей дистиллирован
ной водой до заданного объема и добавляют в нее 10 г лактозы и 0.15 г солянокислого цистина. Сре
ду разливают в пробирки высоким столбиком и стерилизуют при температуре (112 ± 1) X в
течение (30 ± 1) мин. pH готовой среды (7,1 ± 0.1) ед. pH при 25 X .
б) Кукурузно-лактозная среда
Среду готовят по ГОСТ Р 52687.
8