ГОСТ 32427-2013
8.2.1.6 Предварительная подготовка инокулята
Отбирают свежие пробы не менее чем от 10 источников посевной культуры, преимущественно,
из областей, где используется и сбрасывается в окружающую среду большое количество химических
веществ. Отбирают по 1 л образцов активного ила. поверхностных почв, воды из очистных
сооружений, рек. озер, морей и тщательно их перемешивают.
После отстаивания и удаления взвешенных частиц доводят значение pH супернатанта до 7
±
1
раствором гидроксида натрия или фосфорной кислоты. Для заполнения емкости для активного ила
используют необходимый объем отфильтрованного супернатанта и проводят его аэрацию в течение
23.5 ч. Спустя 30 минут после завершения аэрации удаляют примерно 1/3 объема супернатанта
и добавляют равный объем раствора (pH 7), содержащего по 0.1 % глюкозы, пептона и
ортофосфата калия к оставшемуся отстоянному материалу и возобновляют аэрацию. Эту процедуру
повторяют 1 раз в сутки.
Использование емкости для активного ила должно проводиться согласно принципам
надлежащей лабораторной практики: сточные воды не должны содержать загрязнений;
температура должна поддерживаться на уровне (25
±
2)еС и pH - (7
±
1);
ил должен хорошо осаждаться;
аэрация должна быть достаточной для поддержания аэробных условий смеси на протяжении
всего времени;
в активном иле должны присутствовать простейшие организмы, и активность ила должна
проверяться по отношению к референтному веществу как минимум каждые 3 месяца. Активный ил
нельзя использовать в качестве инокулянта по крайней мере, до истечения 1 месяца после отбора и не
более чем после 4 месяцев. После этого, производят отбор образцов равными частями, как
минимум из 10 мест один раз каждые 3 месяца. Чтобы поддержать одинаковую активность свежего и
старого ила. смешивают отфильтрованный супернатант используемого активного ила с равным
объемом отфильтрованного супернатанта недавно собранной смеси 10 образцов и обрабатывают
полученный раствор как описано выше. Использовать культуру как инокулюм можно через 18-24
часа после подкормки.
8.2.1.7 Подготовка колб
Готовят следующие шесть колб:
-колба 1. содержащая раствор исследуемого вещества в воде с концентрацией 100 мг/л:
-колбы 2, 3 и 4, содержащие раствор исследуемого вещества в питательной среде с
концентрацией 100 мг/л:
-колба 5, содержащая раствор референтного вещества (например, анилина) в
питательной среде с концентрацией 100 мг/л;
-колба 6, содержащая раствор чистой питательной среды.
Плохо растворимые вещества добавляют непосредственно в колбы по весу или по объему или
руководствуются приложением Б. учитывая, что использование растворителей или эмульгаторов
недопустимо. Абсорбент СО* добавляют в специальных чашках в экспериментальные сосуды.
Доводят, если это необходимо, pH растворов в колбах 2, 3 и 4 до 7 до внесения инокулята.
8.3 Процедура эксперимента
8.3.1 Вносят небольшой объем посевной культуры в колбы 2. 3 и 4 (тестовые растворы). 5
(контроль активности) и 6 (холостой контроль) для получения концентрации по сухому остатку 30 мг/л.
Инокулят не добавляется в колбу 1, которая используется для абиотического контроля. Собирают
оборудование, проверяют установку на герметичность, начинают перемешивание и измерение
потребления кислорода в темноте. Проверяют температуру, мешалку и кулонометрический
регистратор потребления кислорода и ежедневно фиксируют любые изменения цвета содержимого
сосудов. Оценивают потребление кислорода непосредственно для 6 колб соответствующим методом,
например, шестипозиционным рекордером, который записывает кривую ВПК.
8.3.2 По окончании периода инкубации, обычно на 28 день, измеряют pH содержимого колб и
определяют концентрацию остаточного исследуемого вещества и любых промежуточных соединений и.
в случае исследования растворимых в воде веществ, концентрацию РОУ (приложение В). В случае
исследования летучих веществ необходимо соблюдать специальные меры. Если происходит
нитрификация, по возможности определяются концентрации нитратов и нитритов.
8.4 Данные и отчет о проведении эксперимента
8.4.1 Обработка результатов
8.4.1.1 Данные эксперимента должны быть приведены в прилагаемом отчете о проведении
испытания (технических спецификациях).
8.4.1.2 Потребление кислорода (мг) делят на массу используемого исследуемого вещества (мг)
после определенного периода времени с учетом значения потребления кислорода, полученного в
17