ГОСТ 32149—2013
При необходимости более полной биохимической характеристики культуры пересеивают на цвет
ные среды Гисса с углеводами («короткий пестрый ряд» с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом и
мальтозой) иопределяют их способность образовыватьиндол исероводород.
Сэтой целью суточную культуру, взятую со скошенного питательного или мясо-пептонного агара,
растирают в 1.0 см3 физиологического раствора. Затем по две капли {0,2 см3) взвеси вносят пастеров
скойпипеткойвсреды Гисса, пептонную водуили мясо-пептонныйбульон. Культуральныесреды спосе
вами инкубируют при температуре (37 ± 1)X .
НасредахГиссачерез24ч термостатированияучитываюткислотообразование(средыприобрета
ютрозово-красный цвет)и газообразование (наличие пузырьков в поплавках).
Для обнаружения индола в пробирку с мясо-пептонным бульоном или пептонной водой сразу же
после посева испытуемой культуры помещают полоску фильтровальной бумаги, смоченную насыщен
ным водным раствором щавелевой кислоты. Бумажку помещают таким образом, чтобы она удержива
лась пробкой, но не прикасалась к среде. При наличии индола через 1—3 дня инкубирования при
температуре(37 ± 1) X нижняя частьбумажкиокрашивается в розовый цвет, хорошо заметный в прохо
дящем свете. Индол можно определитьи другим способом: в пробирку ссуточной бульонной культурой
осторожно постенкедобавляют5—10капельреактива Эрлиха. Переддобавлением реактива кбульону
можно ввести 2 см3этилового эфира. При наличии индола не позднее чем через 5 мин в пограничном
слое образуется ярко-красное кольцо. Сальмонеллы индола не образуют.
9.3 Для биохимической идентификациибактерийродаSalmonellaдопускается использованиеэкс
пресс тест-систем, которые представляют собой набор одноразового использования в виде планшета
со стрипами, надно луноккоторых нанесены соответствующие субстраты с индикаторами. Проведение
анализа и учет результатов проводят поинструкции производителя.
9.4 Для подтверждения принадлежности выделенных культур к бактериям рода сальмонелл про
водятсерологическую идентификацию с помощью реакции агглютинации.
9.4.1 Проведение реакции агглютинации
На предметное стекло помещают каплю изотонического раствора хлористого натрия и рядом кап
лю поливалентной агглютинирующей сальмонеллезной сыворотки.
В каждую из приготовленных капель, начиная с изотонического раствора хлористого натрия, вно
сят петлей часть анализируемой колонии, равномерно растирают и покачивают предметное стекло в
течение 30—60 с. Стекло помещают на темный фон и через 0.5—2.0 мин просматривают с помощью
лупы по ГОСТ25706. Агглютинацияпроявляется в видесклеивания бактериальной массы иполногоили
частичного просветления жидкости.
При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей
сыворотки образует гомогенную смесь.
9.5 Допускается проводитьсеротипирование бактерийрода Salmonella сиспользованием метода
латексной агглютинации.
Метод используется в качестве дополнительного подтверждающего теста и основан на визуаль
ном определении наличия конгломератов агглютинации, цвет которых соответствует конкретной серо
логической группе сальмонелл.
Проведение анализа и учет результатов проводят по инструкции производителя.
9.6 Обработка результатов
9.6.1 Результаты исследований оценивают покаждой пробе отдельно.
Интерпретацию результатов анализа выявленных культур проводят поГОСТ ISO 7218.
Культуры, предположительно отнесенные к бактериям рода Salmonella, для окончательной иден
тификацииисследуютпоГОСТISO7218. В этомслучаерезультаты выявлениябактерий родаSalmonella
выдают после полученияответа поокончательной идентификации.
Результаты анализа записывают следующим образом: бактерии рода Salmonella «обнаружены»
или «не обнаружены» в 25см3 (г) продукта.
9.6.2 Допускается для целей экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и/или под
твержденияпринадлежностивыделенныхкультуркбактериям родаSalmonellaприменятьметодыполи
меразной цепной реакции (ПЦР) no {1J: иммуноферментного анализа (экспресс-тесты для выявления
бактерий рода Salmonella); гибридизационногоДНК-РНК анализа; твердофазного иммуноферментного
анализа; использовать бактериологическиеанализаторы, основанные на принципе импеданса.
13