ГОСТ 32149—2013
8.3.2Допускается для целей экспрессного выявления и определения бактерий группы кишечных
палочек (колиформных бактерий) использовать следующее: подложки или пластины в виде подготов
ленной системы, содержащей набор питательных веществ, герметично закрытых непроницаемой мем
браной: бактериологические анализаторы, основанныена оптико-электронном принципе и на принципе
импеданса.
Проведение анализа и учет результатов с использованием таких методов проводят по инструкци
ям к прибору.
9 Метод выявления бактерий рода Salmonella
9.1 Сущность метода
Метод основан на использовании сред обогащения с последующим выделением сальмонелл на
дифференциально-диагностическихсредах, а также на изучении культурально-морфологических, био
химических и серологическихсвойств культур.
9.2 Проведение анализа
25 см3 (г) продукта из средней пробы, с соблюдением стерильности, вносят в колбу, содержащую
225см3одной изсредобогащения(Кауфмана, магниевой, селенитовойили селенит-цистиновойнакопи
тельной). встряхивают и инкубируют при температуре (37 ♦ 1) °С в течение 16—20 ч. Затем проводят
высев бактериологической петлей (диаметр 0.4—0.5 мм) из сред обогащения в чашки Петри с висмут -
сульфитным агаром или средой Плоскирева. или агаром Левина.
Чашки Петри с посевом инкубируют при температуре (37 ± 1) °С. Учет результатов проводят на
висмут-сульфитном агаре через 48 ч. на среде Плоскирева иЛевина — через 18—24ч.
Сальмонеллы на висмут-сульфитном агареобразуютчерныеколониис характерным металличес
ким блеском, при этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка среды под колонией и
нежныесветло-зеленые колонии.
На средахПлоскирева иЭндоколониисальмонеллпрозрачные, насредеЛевина — голубоватые.
При отсутствии типичных или предположительно относящихся к бактериям рода Salmonella коло
ний ил и при наличии слабого роста микробов на плотныхдифференциальныхсредахчашкис посевами
повторно инкубируют при температуре (37 ± 1)°С в течение 20—24 ч.
Затем снова определяют присутствие колоний сальмонелл. При обнаружении подозрительных на
сальмонеллы колоний продолжаютисследование. В противном случае работуспосевами прекращают.
При наличиитипичных, характерныхдля сальмонелл колоний, изнихберутне менеетрехколоний. Если
имеется наодной чашке менее трехтипичныхколоний, то берут все выросшиеподозрительныенасаль
монеллы колонии для пересева в пробирки: со скошенным питательным или мясо-пептонным агаром, с
мясо-пептониым бульоном, с пептонной водой и на одну издифференциальных сред Ресселя. Крумви-
де-Олькеницкого, Клиглера.
Среды Ресселя. Крумвиде-Олькеницкого, Клиглера засевают сначала штрихом на скошенную
поверхность, а затем уколом в глубину столбика.
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1)°С в течение (24 11) ч.
Выросшиекультуры споверхностискошенного агара используютдляпостановки реакции агглюти
нации и приготовления мазков. Мазкиокрашивают по Граму и микроскопируют.
При использовании в исследованиях тест-наборов для биохимической идентификации бактерий
рода Salmonella окрашивание по Граму не обязательно.
Посевы на мясо-пептонном бульоне и пептонной воде используютдля определения способности
выделенных культуробразовыватьсероводород ииндол.
Подтверждение наличия сальмонелл в продукте дает рост на средах Ресселя. Крумвиде-Ольке
ницкого. Клиглера.
На средахРесселя, Крумвиде-Олькеницкого. Клиглераоцениваютокраскуи газообразование. При
ростесальмонелл всредах Ресселя. Крумвиде-Олькеницкого. Клиглера вмалиновый цветокрашивает
ся столбик (за счет расщепления глюкозы), скошенная часть среды остается бледно-розовой при отсу
тствии расщепления лактозы, сахарозы или обоих сахаров. Газообразование устанавливают по
трещинам и разрывам столбиков агара. На средах Крумвиде-Олькеницкого. Клиглера образование
сероводорода обнаруживаютнаоснованиипочернениясреды (от темнойлиниипоместупротоколасре
ды до разлитого почернения всего столбика). Расщепление мочевины выявляется по восстановлению
первоначального цвета (бледно-розового) столбика среды.
Сальмонеллы мочевину не разлагают, сероводородобразуют.
12