ГОСТ 32149—2013
Для приготовления желточной эмульсии надно стерильной чашки Петри помещают куриное яйцо,
тщательно протираютего ватой, смоченной этиловымспиртом, иобжигают. Стерильным пинцетом про
бивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия, через одно из этих отверстий из яйца
полностью удаляют белок, а затем, несколькоувеличив отверстие, выливают желток в стерильную кол бу
вместимостью 200 см3. Кжелтку постепеннодобавляют (частями по20—30см3)200см3стерильного
изотоническогораствора, содержимоетщательновстряхивают(гомогенизируют)до получениягомоген
ной массы.
Для приготовления желточно-солевого агара на 1дм3стерильного расплавленного иостуженного
до (45 ± 1) вС солевого агара добавляют 200 см3желточной эмульсии, после полного размешивания
желточно-солевой агар разливают встерильные чашки Петри по20—25 см3ихранятв холодильникедо
5—7сут.
6.4 Приготовленные растворы реактивов, если в техническом документе не установлено иначе,
хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике при температуре 4 °С—8 °С не
более 3 месили при температуре 18°С—23 °С — не более 1мес.
6.5 Приготовление мазков и окраска по методу Грама по ГОСТ ISO 7218. Допускается проводить
окраску мазков модифицированным методом по Граму (без фенола), а также с использованием тест-
полосокдляопределенияаминопептидазы (экслресс-методопределенияграмотрицательныхиграм по
ложительных микроорганизмов).
7 Метод выявления и определения количества мезофильных аэробных
и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)
7.1 Сущность метода
Метод основан на высеве определенного количества продукта в плотные культуральные среды,
аэробном культивировании посевов при температуре (30 ♦ 1) °С в течение (72 ± 3) ч. подсчете всех
выросших видимыхколоний иопределении количества мезофильныхаэробных ифакультативно-анаэ
робных микроорганизмов в 1см3(г) продукта.
7.2 Проведение анализа
Из навески подготовленной пробы продукта (см. 6.1) готовят исходное и ряд 10-кратных разведе
ний (см. 6.2) дотакой степени, чтобы можнобылоопределитьпредполагаемоеколичество мезофильных
аэробных ифакультативно-анаэробных микроорганизмов в 1см3(г) яичного продукта.
Посевы проводят глубинным агаровым методом. Перед посевом чашки маркируют. На дне чашки
Петри маркером ставят номер исследуемого образца продукта, разведение идату. Высевают одновре
менно в две чашки Петри (параллельные определения) по 1см3соответствующих последовательных
разведений. Пипеткус посевным материаломдержатподуглом45°. не касаяськонцом пипеткидна чаш
ки.
В каждуючашкуПетри с посевным материалом не позднеечемчерез 15миндобавляют(18 ±2)см3
однойизагаризованных расплавленных иохлажденныхдо температуры (45 ± 1) °С культуральныхсред
(питательного, мясо-пептонного агара. ГРМ-arapa или др.). Чашки с посевами, залитыми питательной
средой, осторожнопокачиваютили вращаютдля равномерногораспределенияпосевного материалаво
всей питательнойсреде.
Чашки Петри с посевами расставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания
культуральной среды.
Для предотвращения роста микроорганизмов, образующих налеты на поверхности среды (ползу
чий рост), в чашки Петри с посевным материалом наливают (13 ♦2) см3выбранной культуральной сре
ды. перемешивают и после застывания на нее наливаютбез перемешивания второй слой — (5*2)
см3 этойже разогретой и охлажденнойдотемпературы (45 ± 1)вС культуральной среды.
После застываниясредычашкис посевами, перевернутыедном вверх, культивируютвтермостате
при температуре (30 i 1) °С в течение (72 ± 3) ч. Допускается предварительный учет количества вырос
ших колонийчерез (48 ± 1) ч с последующим окончательным учетом еще через (24 ± 1)ч. Чашки Петрис
посевами распределяют в термостате по ГОСТ ISO 7218.
7.3 Обработка результатов
7.3.1 Результаты анализа оцениваютпо каждой пробеотдельно.
Подсчет микроорганизмов проводят по ГОСТ ISO 7218. Подсчет проводят в посевах того разведе
ния. количество колоний в котором не более 300.
ю