ГОСТ 32149—2013
Перед посевом в асептических условиях в колбу добавляют 2 см3 раствора Люголя (см. 6.3.1),
10 см3 50 %-ного раствора серноватистокислого натрия (тиосульфата), 5 см3 стерильной желчи и 1см3
водного раствора бриллиантового зеленого в соотношении 1:1000. Смесь тщательно взбалтывают.
6.3.23 Желчь
Отобранную асептически желчь крупного рогатого скота прогревают на кипящей водяной бане в
течение 1 ч. После отстаивания фильтруют и разливаютпо колбам, стерилизуют текучим паром три дня
подрядпо 20 мин или однократно в автоклаве при температуре (112 ± 1) вС.
Можно использовать сухую желчь, при этом 1 г сухой желчи соответствует 10 см3 натуральной
желчи.
6.3.24 Селенитовая среда Лейфсона
Для приготовлениясреды готовятдва раствора: А и Б.
Раствор А состоит из 5 г пептона. 7 г безводного двузамещенного фосфорнокислого натрия. 3 г
однозамещенного фосфорнокислого натрия. 4 г химически чистой лактозы, 1 дм3дистиллированной
воды, pH (7,0 ± 0,1)ед. pH. Компоненты смешивают, разливают в стерильную посуду по225см3 истери
лизуюттекучим паром по 30 мин или при (112 ± 1) °С в течение 30 мин.
В раствор Б входит 10 %-ный раствор кислого селенистокислого натрия, приготовленного на сте
рильнойдистиллированной воде (готовят перед употреблением).
Передначалом работы к 225 см3раствора А стерильнодобавляют9 см3раствора Б.
6.3.25 Магниевая (хлористо-магниевая) среда
Среда состоит из трех растворов.
Раствор I: пептон — 4.2 г, натрия хлорид — 7.15 г, калия дигидрофосфат— 1,48 г. дрожжевой
диализат — 9 см3, вода дистиллированная — 890 см3.
Раствор II: магния хлорид — 35,7 г, вода дистиллированная — 90 см3.
Раствор III: бриллиантовый зеленый 0.5 %-ный, водный раствор — 0,9 см3.
Все три приготовленныхрастворасмешивают, разливаютв колбы, флаконы, пробирки. Стерилизу
ютпри (112 ± 1) °С 30 мин.
При отсутствиидрожжевого диализатадопускается заменаегодрожжевым экстрактом.
6.3.26 Среда Крумвидо-Олькеницкого (трехсахарный агар с мочевиной)
Агар питательный сухой — 25 г, лактоза — 10 г, сахароза — 10 г, глюкоза — 1г. железо (III)аммо
ний сульфат (соль Мора) — 0,2 г, натрия тиосульфат (гипосульфит, серноватистокислый натрий) —
0.3 г. мочевина — 10 г, феноловый красный 0.4 %-ный водный раствор — 4 см3, вода
дистиллирован ная — 1 дм3.
Соли предварительно растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и
мочевинутакжерастворяютв небольшихобъемахводы при подогревании на водяной бане. Сухой пита
тельныйагаррасплавляютвоставшемсяобъемеводы при нагревании ипомешивании. Затем всеингре
диенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр,
устанавливают pH (7.3 ±0,1) ед. pH, добавляют индикатор и разливают в стеклянные пробирки по 6—
7см3.
Среду стерилизуют при температуре (112 ± 1) °С в течение 20 мин. скашивают, оставляя столбик
2.0—2.5 см. Готовая среда бледно-розового цвета. Среду хранят при комнатной температуре не более
7 сут.
6.3.27 Дрожжевой экстракт
100 г измельченных хлебопекарных прессованных дрожжей заливают 1 дм3дистиллированной
воды, кипятят при постоянном перемешивании до тех пор, пока не сойдет пена, ипомещают на 24 ч при (5
± 1) °С в холодильник. Затем эмульсию фильтруют через вату и фильтрат стерилизуют 20 мин при (121
±1)°С.
5см3жидкого дрожжевого экстракта равноценны 1гдрожжевого экстракта в порошке.
6.3.28 Солевой бульон
1 дм3мясо-пептонногобульона и 6,5 г хлористогонатриясмешивают в колбе вместимостью 2дм3,
разливаютв пробиркипо 10см3.Стерилизуют(20 ± 1)минвавтоклавепритемпературе(121 ± 1)вС.Хра-
нят не более 28 сут при температуре (4 ± 1) °С.
6.3.29 Желточно-солевой агар
К 1дм3солевого бульона по 6.3.31 добавляют 20 г питательного агара, расплавляют на водяной
бане, при необходимостифильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по
100 см3в колбы вместимостью 250см3и стерилизуют при (121 ± 1) °С в течение 30 мин. Получаютсоле
вой агар. Вместо солевого бульона можно использовать как основу сухой питательный агар, мясо-пеп-
тонный бульон, бульон Хоттингера. добавляя 65 г хлористого натрия.
9