ГОСТ 31719—2012
Т аб лиц а 1 — Программа амплификации фрагментов видоспецифичной растительной ДНК (сои. кукурузы, кар
тофеля)
Режим амплификации
Этап программыПроцессЧисло циклов
температура. ’’Свремя, с
194180Денатурация ДНК1
9445Денатурация ДНК
27030Отжиг праймеров35
7240Синтез ДНК
372240Синтез ДНК1
П р и м е ч а н и е — Использование амплификаторов различных моделей может потребовать изменения
времени каждого шага и.’или изменения температуры отжига праймеров на 1 "С — 2 ’С.
Т аб лиц а 2 — Программа амплификации фрагментов еидослецифичнойДНК животных (крупного рогатого скота,
свиньи, курицы)
Этап программы
Режим амплификации
Процесс
Число циклов
температура. X
вреыя.с
1
94
180
Денатурация ДНК
1
2
94
30
Денатурация ДНК
35
62 — для крупного рогатого скота.
65 — для свиньи.
66 — для курицы
30
Отжиг праймеров
72
30
Синтез ДНК
3
72
180
Синтез ДНК
1
П р и м е ч а н и е — Использование амплификаторов различных моделей может потребовать изменения
времени каждого шага и/или изменения температуры отжига праймеров на 1 ГС — 2 "С.
По окончании действия программы пробирки извлекают из амплификатора и в штативе передают
на этап детекции продуктов ПЦР
7.2 Качествонное определение фрагментов видоспоцифичной ДНК растений и животных
с использованном наборов реагентов для ПЦР с высушенными праймерами
7.2.1 В зависимости от количества анализируемых проб в штативе размещают и маркируют ми
кропробирки с лиофильно высушенной амплификационной смесью, одну микропробирку с лиофильно
высушенной амплификационной смесью К-. одну микропробирку с лиофильно высушенным содержи
мым К+. В случае исследования многокомпонентных продуктов число микропробирок на одну пробу, а
также число микропробирок для отрицательных и положительных контролен рассчитывают исходя из
того, какое число видов ДНК планируется идентифицировать.
7.2.2 В каждую микропробирку с ПЦР смесью при помощи автоматического дозатора вносят
10 мкл ПЦР-растворителя.
7.2.3 В микропробирку К- вносят 10 мкл ТЕ-буфера, подготовленного по 6.2.12. В микропробирки
с ПЦР-смесью добавляют по 10 мкл экстракта ДНК каждого из исследуемых образцов, подготовленных
по разделу 6. В последнюю очередь в микропробирку К+ вносят 10 мкл ТЕ-буфера. подготовленного по
6.2.12. Содержимое микропробирок растворяют путем легкого перемешивания на микроцентрифуге-
встряхивателе. После этого капли ПЦР-смеси собирают осаждением со стенок микропробирок путем
центрифугирования на микроцентрифуге-встряхивателе в течение от 3 до 5 с.
7.2.4 Если для проведения амплификации используется амплификатор без нагреваемой крышки,
то в каждую микропробиркудобавляют по 20—25 мкл (две капли) минерального масла.
9