ГОСТ 31719—2012
формируя среднюю пробу, которую маркируют. Перед началом исследования пробу измельчают при
помощи скальпеля (ножниц), помещают в фарфоровую ступку и растирают фарфоровым пестиком до
однородного мелкодисперсного, гомогенного состояния. С целью получения лабораторной пробы для
выделения ДНК при помощи одноразового шпателя отбирают от гомогенной средней пробы от 100 до
150 мкл материала по насыпному объему, который помещают в одноразовую микропробирку вместимо
стью 1.5 см3, маркируют и используют для выделения ДНК.
5.3.4Микропробирки с лабораторными пробами маркируют номером, нанесенным на пробирки
(контейнеры) со средними пробами. После получения лабораторных проб пробирки (контейнеры) с
оставшимися средними пробами помещают на хранение в течение одного месяца в условиях, указан
ных производителем исследуемого материала.
6 Выделение ДНК
Сущность методики заключается в том. что вся ДНК. полученная в результате клеточного лизиса,
связывается с сорбентом и в таком состоянии проходит стадии очистки, а затем при помощи элюции
переводится в раствор.
6.1 Подготовка набора реагентов для выделения ДНК
6.1.1 Содержимое флаконов с ОБ 1 и ОБ 2 переносят в мерные цилиндры и доводят объем до
50 см3 этиловым спиртом (95 %, ректификат). Затем переливают в те же флаконы и перемешивают,
переворачивая плотно закрытые флаконы 5—6 раз.
6.1.2 Хранят рабочие растворы ОБ 1 и ОБ 2 в плотно закрытых флаконах при температуре 4 °С в
течение одного года.
6.2 Выделение ДНК сорбснтным методом с помощью набора реагентов
6.2.1 В пробирку с подготовленной по 5.3 пробой вносят 400 мкл ЛБ (в случае кристаллизации
перед использованием его необходимо подогреть в термостате при температуре от 50 °С до 60 °С и
перемешатьдо полного растворения осадка), гомогенизируют пробу с помощью микрогомогенизатора с
целью дополнительного измельчения пробы и наиболее полного смачивания ее лизирующим буфером.
6.2.2 Пробу инкубируют в термостате 30 мин при температуре 65 °С, после чего передают ее на
этап выделения ДНК.
6.2.3 Содержимое пробирки перемешивают на микроцентрифуге-встряхивателе. В случае, ког
да содержимое пробирки затвердело во время инкубации в термостате, в эту же пробирку добавля
ют 300 мкл (при необходимости до 1000 мкл) ЛБ и тщательно перемешивают на микроцентрифуге-
встряхивателе. Затем пробу центрифугируют на высокоскоростной центрифуге в течение 10 мин при
8000 об/мин.
6.2.4 Надосадочную жидкость полностью отбирают с помощью автоматического дозатора, не за
девая осадка, и переносят в чистую микропробирку вместимостью 1.5 см3, меняя наконечники при
переходе от одной пробы к другой.
6.2.5 Добавляют к кадосадочной жидкости 40 мкл суспензии сорбента. Перед использованием
сорбент перемешивают на микроцентрифуге-встряхивателе до получения однородной суспензии. Да
лее содержимое микропробирки перемешивают на микроцентрифуге-встряхивателе и инкубируют при
комнатной температуре от 7 до 10 мин, периодически перемешивая содержимое путем переворачива ния
плотно закрытой пробирки 2—3 раза. Затем содержимое микропробирки центрифугируют на высо
коскоростной центрифуге в течение 10 с при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость полностью удаля ют
при помощи автоматического дозатора.
6.2.6 К осадку добавляют 500 мкл рабочего раствора ОБ 1, содержимое пробирки сначала пере
мешивают на микроцентрифуге-встряхивателе до получения однородной суспензии, а затем центрифу
гируют в течение 20 с при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют при помощи автоматического
дозатора.
6.2.7 К осадку прибавляют 500 мкл рабочего раствора ОБ 2. содержимое микропробирки сначала
перемешивают на микроцентрифуге-встряхи-вателе до получения однородной суспензии, а затем цен
трифугируют в течение 20 с при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют при помощи автомати
ческого дозатора.
7