ГОСТ РИСО 14729—2010
Приложение В
(справочное)
Пример метода мембранной фильтрации
В.1 Материалы и реактивы
В.1.1 Питательные среды и реактивы
В.1.1.1 Разбавляющая жидкость с нейтрализаторами или без них.
В.1.1.2 Триптоновый соевый агар (TSA).
в 1.1.3 Фосфатно-солевой раствор Dulbecco с буферной добавкой, без хлорида кальция и хлорида марган
ца (DPBS): 200 мг/л KCI. 200 мг/л КН,РОц. 8000 мг/л NaCI и 2160 мг/л NajHPO., 7Н^О или подходящий раствори
тель.
В.1.1.4 Фосфатно-солевой раствор Dulbecco с буферной добавкой плюс 0.05 % (масса/объем) лолисорбита
80 (DPBST) или подходящий растворитель.
В.1.1.5 Оцененные нейтрализирующие реактивы/среды (при необходимости), например нейтрализующий
бульон Dey-Engley (DEB) и бульон Letheen’\
В.1.2 Испытательное оборудование
Обычное испытательное оборудование (например, стерильные пипетки, чашки Петри, контейнеры), включая
следующие устройства:
В.1.2.1 Стерильный аппарат для размещения стерильного мембранного фильтра и фильтрата.
В.1.2.2 Оборудование для создания вакуума или давления, чтобы обеспечить прохождение жидкой фазы
инокулированного тест-раствора через мембранный фильтр с соблюдением стерильности.
Номинальный размер отверстия мембранного фильтра должен быть не более 0.45 мкм. диаметр должен со
ставлять не менее 47 мм. Мембранный фильтр не должен содержать химических веществ, которые могут оказать
токсическое действие на микробные клетки.
В.2 Метод испытания и результаты
В.2.1 В стерильном фильтровальном устройстве (В.1.2.2) смачивают стерильный мембранный фильтр
(В.1.2.1) в стерильном средстве DPBST (В.1.1.4) или в подходящем разбавителе.
В.2.2 С соблюдением стерильности переносят измеренный объем вносимого тест-раствора в стериль
ное средство DPBST объемом от 50 до 100 мл (В.1.1.4) или в растворяющую жидкость и тщательно перемеши
вают.
П р и м е ч а н и е — При этом уменьшается вероятность того, что многочисленные КОЕ сосредоточатся на
фильтре в одном и том же месте.
В.2.3 Перекачивают разбавленный раствор в мембрану и фильтр посредством вакуума или давления.
В.2.4 Промывают мембранный фильтр несколько раз растворяющей жидкостью, которая может содержать
дополнительные нейтрализующие вещества (если необходимо).
П р и м е ч а н и е — Трех объемов растворяющей жидкости (каждый по 100 мл) обычно достаточно для уда
ления и/или растворения противомикробного вещества. Действительный объем следует определить эмпиричес
ким путем по каждому составу для каждого вводимого микроорганизма.
В.2.5 Инкубируют мембранный фильтр соответствующими средами для обеспечения выращивания КОЕ на
поверхности фильтра.
П р и м е ч а н и е — Это можно осуществить путем стерильного удаления мембранного фильтра из сбороч
ного узла фильтра и установкой мембраны на поверхности стерильной агаровой чашки без наличия жидкости или
мембрану можно поместить в агаровый сандвич. Допускается использовать модуль стерильного мембранного
фильтра, что требует наличия дополнительных стерильных сред для герметичного фильтра и инкубации мем
браны в месте нахождения.
8.2.6 Определяют среднее число КОЕ/мл, поддающихся подсчету, на мембранных фильтрах (от 3 до
100 КОЕ/47 мм — на фильтре для бактерий и отЗ до 10 КОЕ/47 мм — на фильтре для плесени). Вычисляют и доку
ментально фиксируют значение КОЕ/мл инокулированного раствора.
В.З Средства контроля
Следует подтвердить эффективность нейтрализатора путем ввода аликвотной пробы инокулированного
тест-раствора в стерильную растворяющую жидкость объемом от 50 до 100 мл. используя то же соотношение объе-
" Нейтрализующий бульон Dey-Engley (DEB) и бульон Letheen приведены в качестве примеров. Данная ин
формация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.
12