ГОСТ Р ИСО 14729—2010
6.3.1.4 Подвергают каждую из 1,0 мл аликвотных проб, взятыхчерез заданные промежутки време
ни, действию соответствующей серии десятичных разведений в оцененных нейтрализующих средах.
Хорошо перемешивают взвесь встряхиванием (на вортексе) и дают постоять, чтобы завершить
нейтра лизацию. Условия нейтрализации должны быть основаны на проверке контроля
восстановительной среды (см. 6.3.2.2).
Если противомикробное средство в составе невозможно надлежащим образом инактивировать
или нейтрализовать, удаляют его оцененным методом мембранной фильтрации (см. приложение В).
6.3.1.5 Определяют число жизнеспособных микроорганизмов в соответствующих растворах пу
тем приготовления тройных чашек (если не оговорено иное) с подходящей восстановительной средой
(например, ТБАдля бактерий и SDA для плесени и дрожжей).
Если была применена мембранная фильтрациядля удаления или нейтрализации лротивомикроб-
ных средств, культивируют мембраны на этих средах.
Если используют чашечный метод розлива, хранят агар перед разливкой в разливочных чашках
при температуре ниже 50 °С.
Агаровые среды, используемые для определения количества жизнеспособных микроорганизмов,
также могут содержать противомикробные инактиваторы или нейтрализаторы.
6.3.1.6 Чашки с тест-культурами должны быть инкубированы при температуре от 30 °С до 35 X .
Посевы с дрожжевыми грибами (дрожжами) инкубируют при температуре от 20 X до 25 °С или от 30 X
до 35 °С. Посевы с плесневыми грибами инкубируют при температуре от 20 вС до 25 X . Должны
быть определены периоды инкубации для оптимального пророста бактерий, дрожжей и плесени.
Периоды инкубациидолжны быть основаны на анализе контроля питательной среды (см. 6.3.2).
Записываютчис ло наблюдаемых КОЕ/мл на чашках, которые поддаются подсчету.
П р и м е ч а н и е — Чашки во время инкубации следует периодически наблюдать, чтобы предотвратить по
явление чашек, в которых из-за чрезмерного роста бактерий, дрожжей и плесени КОЕ не поддаются подсчету.
6.3.1.7 Определяютсреднее число КОЕ. поддающихся подсчету, начашках. Вычисляют уменьше
ние числа микроорганизмов в заданные моменты времени.
П р и м е ч а н и е — Каждая чашка с КОЕ, поддающимися подсчету, содержит от 30 до 300 КОЕ для бакте
рий или дрожжей и от 8 до 80 КОЕ — для плесени, за исключением случаев, когда КОЕ наблюдаются только в чаш
ках для разведения 10° или 10 "\
6.3.1.8 Отсутствие микроорганизмов необходимо документировать, например, написав «0» или
«НР» (нет роста), когда чашки для всех растворов образца в отдельный момент времени не содержат
КОЕ.
6.3.2Средства контроля
6.3.2.1 Контроль вносимой бактериальной культуры
Готовят объем вносимой бактериальной культуры путемдиспергирования идентичнойаликвотной
пробы инокулированного материала в объеме растворителя по 6.3.1.1 (например. DPBST) для получе
ния конечной концентрации от 1.0 х 105до 1.0 х 106 КОЕ/мл. Следует убедиться, что объем вносимой
бактериальной культуры не превышает 1 % объема образца. Диспергирование вносимой культуры не
обходимо обеспечить перемешиванием. Оценивают данный контрольный образец в начале испытания
на КОЕ/мл. чтобы продемонстрировать пригодность среды, используемой для роста испытуемого мик
роорганизма. и определяют концентрацию исходной вносимой бактериальной культуры. Помещают со
ответствующую аликвотную пробу из каждой пробирки на восстановительную агаровую чашку в
тройном объеме (если не оговорено иное).
6.3.2.2 Контроль питательной среды
Разбавляют 1/10 раствора дезинфицирующего средства в оцененном нейтрализующем бульоне
(1 мл в 9 мл). Дают бульону постоятьдо завершения реакции нейтрализации. Готовят вторую контроль
ную пробирку, содержащую 10 мл подходящего растворителя (например. DPBST). Вводят в пробирки
достаточный объем культуры, чтобы получилось от 10 до 100 КОЕ/мл вводимого микроорганизма
на каждую чашку. Выдерживают в течение соответствующего периода времени при температуре
окружаю щей среды, не допуская размножения инокулированных микроорганизмов. Помещают
соответствую щую аликвотную пробу из каждой пробирки на чашку с питательным агаром в тройном
объеме (если не оговорено иное).
Для пророста бактерий следует выдерживать чашки при температуре от 30 X до 35 X . Для про роста
дрожжей следует выдерживать чашки при температуре от 20 X до 25 X или от 30 X до 35 X .
7