ГОСТ Р ИСО 10993-6—2009
Для образцов цилиндрической формы выбирают их среднюю часть. Для имплантатов цилиндри
ческой формы с прорезями — центральные части между прорезями, а также между плоскими поверх
ностями имплантата.
При окончании каждого исследования число образцов, необходимых для дальнейших исследова
ний. должно соответствовать требованиям приложений В. С и D. Образцы для анализа должны быть по
лучены. по крайней мере, от трех животных.
5.5.2 Макроскопическое исследование
Исследуют возможные изменения нормальной структуры ткани каждого участка имплантации с
помощью оптической линзы. Оценивают также состояние региональных лимфатических узлов
ТНпву[32]. Регистрируют вид и степень проявления обнаруженных реакций ткани, такие как гематомы,
отеки, образование рубцов и (или) другие выраженные отклонения. Отмечают наличие, форму и лока
лизацию имплантата, включая возможные остатки деградируемого материала. Для документирования
необходимо фотографировать места имплантации.
В дополнение к осмотру участков имплантации следует обратить внимание на состояние здоровья
животного или его реакцию на имплантат, для полного анализа проводят вскрытие трупа.
5.5.3 Извлечение имплантата и подготовка образцов тканей
После гуманной эвтаназии животного вырезают имплантат вместе с достаточным количеством
окружающей его ткани для оценки местной тканевой реакции. Если имплантируемый образец невоз
можно обнаружить (деградируемый/резорбируемый материал), то образец нормальной ткани выреза
ют вокруг отмеченного места имплантации на расстоянии нескольких миллиметров. При исследовании
биостабильных имплантатов необходимо осуществить забор лимфатических узлов, служащих индика
торами патологических процессов. При исследовании биодеградируемых имплантатов также необхо
дим забор лимфатическихузловдля возможного обнаружения в них продуктовдеструкции материалов.
П р и м е ч а н и е — Необходимо заметить, что у некоторых видов животных не всегда удается обнаружить
лимфатические узлы.
При обнаружении отклонений в здоровье животного, выраженных патологических процессов или в
случае, если протоколом эксперимента предусмотрена оценка системной токсичности, возможен забор
других внутренних органов.
Для проведения гистологических исследований вырезанные участки ткани обрабатывают по при
нятой стандартной схеме: фиксация, размельчение, приготовление блоков, изготовление срезов и их
окраска. В отчет записывают расположение имплантата, число срезов и их форму.
При использовании традиционных методик выделенный образец ткани с имплантатом вскрывают
до или после обработки консервантом и регистрируют в отчете состояние поверхности имплантата и
окружающих его тканей. Необходимо соблюдать особую осторожность, чтобы не повредить ткани, при
лежащие к поверхности имплантата.
При исследовании поверхности раздела имплантата и ткани предпочтительно применять твердый
пластик для формирования блоков образца ткани с имплантатом in situ. Для приготовления гистологи
ческих срезов используют соответствующие методики.
Необходимо продемонстрировать, что методика подготовки блоков с использованием пластика не
вызывает значительных изменений структуры ткани, прилегающей к поверхности имплантата.
П р и м е ч а н и е — Для «мягких» имплантатов в мягких тканях подготовку образцов для гистологического
анализа следует проводить без удаления имплантата.
5.5.4 Микроскопические исследования
Система баллов, применяемаядля оценки гистологических исследований, должна учитывать сте
пень местной реакции ткани по области ее распространения либо количественно (например, в микро
метрах). либо полуколичественно (см. приложение Е). Регистрируют ориентацию имплантата в срезе,
число срезов и геометрию среза.
Оценивают и регистрируют следующие параметры биологической реакции:
- степень фиброза/толщину фиброзной капсулы (в микрометрах) и воспаления:
- дегенерацию, определяемую изменениями в морфологии ткани;
- число и распределение клеток, характеризующих воспалительный процесс в срезах ткани, таких
как полиморфоядерные нейтрофилы, лимфоциты, плазматические клетки, эозинофилы, макрофаги и
многоядерные клетки, в зависимости от расстояния от границы раздела имплантат/ткань;
- наличие, степень и тип некроза ткани;
6