ГОСТ 30364.2-96
3.3.5 Метод выявления бактерий рода Staphylococcus aureus
Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в селектив
ные питательные среды, способности стафилококков расти на средах с повышенным содержанием
хлористого натрия, коагулировать плазму крови кролика и образовывать кислоту из маннита
и мальтозы в аэробных условиях.
3.3.5.1 Проведение контроля
Сухие яичные продукты в количестве 1г, жидкие — 1см3 высевают в пробирки, содержащие
по 9 см3солевого бульона, приготовленного по 3.2.4.22.
Через 24 ч инкубирования при температуре (37±1) *С из солевого бульона проводят пересев
бактериологической петлей на чашки Петри с подсушенным желточно-солевым агаром. Чашки с
посевами инкубируют при температуре (37±1) *С в течение 18—24 ч.
Для лучшего выявления пигментов после суточной инкубации чашки с посевами выдерживают
на свету при комнатной температуре 18—24 ч.
На желточно-солевом агаре колонии Staphylococcus aureus имеют форму выпуклых дисков
диаметром 2—4 мм желтого, белого, кремового, лимонного, золотистого цветов с ровными краями,
вокруг колоний образуется радужное кольцо.
Из характерных колоний, подозрительных на Staphylococcus aureus, готовят мазки, окрашивают
по Грачу и микроскопируют. Колонии грамположительных мелких кокков, гроздевидно располо
женные в мазке, бактериологической петлей отсевают в чашки Петри с питательным или мясо-
пеп-тонным агаром. Посевы инкубируют при температуре (37±1) ’С в течение 18—24 ч.
Из выросших на агаре подозрительных на Staphylococcus aureus колоний после проверки мазков
на чистоту культуры под микроскопом ставят реакцию плазмокоагуляцни. Для этого вдве пробирки
помешают по 0.5 см3разведенной кроличьей плазмы. В одну пробирку вносят петлей исследуемую
суточную агаровую культуру, другую пробирку оставляют незасеянной. Пробирки помещают
в термостат при температуре (37±1) *С. Учет результатов проводят через 2—4 ч и пробирки
оставляют до утра при комнатной температуре для окончательного учета. Пробирки следует
просматривать осторожно, чтобы не разрутшгть образовывающийся сгусток.
При учете реакции плазмокоагуляцни могут наблюдаться три степени активности фермента
коагулазы:
++++ —сгусток плотный, при наклоне пробирки неподвижен;
+++ —сгусток, имеющий небольшой отсек, при наклоне пробирки подвижен, плотная коагу
ляция плазмы;
++ —сгусток в виде взвешенного мешочка, неполная коагуляция плазмы с образованием
подвижного сгустка в центре плазмы.
Все три варианта являются положительным результатом.
Подозрительные на Staphylococcus aureus колонии, выросшие на желточно-солевом агаре,
бактериологической петлей пересевают в чашки Петри, содержащие агарнзованную среду с манни
том (или мальтозой) и индикатором феноловым красным. Посевы термостатируют при температуре
(37±1)"С в течение (24±1) ч. При положительной реакции вокруг колонии наблюдается желтое
окрашивание среды, четко контрастирующее с пурпурно-красным фоном.
3.3.5.2 Обработка результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
Наличие грамположительных гроздевидно расположенных мелких кокков в мазках из харак
терных колоний на желточно-солевом агаре, положительная реакция плазмокоагуляцни. фермента
ция маннита и мальтозы с образованием кислоты свидетельствуют о выявлении в 1 г или в 1см3
яичных продуктов Staphylococcus aureus.
УДК 664.8.001.4:006.354МКС 67.120.20Н19ОКСТУ 9209
Ключевые слова: методы, микробиологический контроль, средства контроля, проведение контроля
1452