ГОСТ 30364.2-96
питательный агар расплавляют в оставшемся объеме воды при нагревании и помешивании. Затем
все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый
фильтр, устанавливают pH (7,3±0,1), добавляют индикатор и разливают в стеклянные пробирки по
6—7 см3. Среду стерилизуют при температуре (112±1)’С в течение 20 мин, скашивают, оставляя
столбик 2—2,5 см. Готовая среда бледно-розового цвета. Среду хранят при комнатной температуре
не более 7 суг.
3.2.4.21 Дрожжевой экстракт
100 г измельченных прессованных дрожжей заливают 1дм3 дистиллированной воды, кипятят при
постоянном перемешивании до тех пор, пока не сойдет пена, и помешают па 24 ч при (5±1)’С в
холодильник. Затем эмульсию фильтруют через вату и фильтрат стерилизуют 20 мин при <121±I) "С.
5 см3 жидкого дрожжевого экстракта равноценны 1 г дрожжевого экстракта в порошке.
3.2.4.22 Солевой бульон
1дм3 мясо-пептонного бульона no 3.2.4.2 и 6,5 г хлористого натрия смешивают в колбе
вместимостью 2 дм3, разливают в пробирки по 10 см3. Стерилизуют (20±1) мин в автоклаве при
температуре (121±1) *С. Хранят не более 28 сут при температуре (4±1) ’С.
3.2.4.23 Желточно-солевой агар
К приготовленному по 3.2.4.22 1дм3 солевого бульона добавляют 20 г питательного агара,
расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр,
рахшвают мерным цилиндром по 100 см3 в колбы вместимостью 250 см3 и стерилизуют при
(121±1) “С в течение 30 мин. Получают солевой агар. Вместо солевого бульона можно использо
вать, как основу, сухой питательный агар, мясо-пептонный бульон, бульон Хоттингера. добавляя
65 г хлористого натрия.
Для приготовления желточной эмульсии на дно стерильной чашки Петри помешают куриное
яйцо, тщательно протирают его ватой, смоченной этиловым спиртом, и обжигают. Стерильным
пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия, через одно из этих
отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают
желток в стерильную колбу вместимостью 200 см3. К желтку постепенно добавляют (частями по
20—30 см3) 200 см3 стерильного изотопического раствора, содержимое тщательно встряхивают до
получения гомогенной массы.
Для приготовления желточно-солевого агара на 1дм3стерильного расплавленного и остужен
ного до (45±1) "С солевого агара добавляют 200 см3 желточной эмульсии, после полного размеши
вания желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20—25 см3 и хранят в
холодильнике до 5—7 сут.
3.2.4.24 Приготовление реактива Эрлиха
В 50 см3 этилового спирта с массовой долей 96 % растворяют 4 г параднметнламидобензаль-
дегида, затем медленно добавляют 50 см3 концентрированной соляной кислоты. Реактив хранят в
склянке из темного стекла при температуре 4—8 *С.
3.2.4.25 Бумага индикаторная для обнаружения индола
Листы фильтровальной бумаги обильно смачивают горячим насыщенным (12 %) раствором
щавелевой кислоты, высушивают при температуре (23±2) *С. затем нарезают полосками шириной
0,2—0,4 мм, длиной 5—6 см и хранят в банках темного стекла под пробками.
3.2.4.26 Карболовый раствор кристаллического фиолетового или генциан фиолетового
1 г кристаллического фиолетового или генциан фиолетового растирают в фарфоровой ступке
с 2 г кристаллической карболовой кислоты (фенола). Во время растирания небольшими порциями
приливают 10 см3 этилового спирта с массовой долей 96 %. Раствор фильтруют через влажный
бумажный фильтр. Растворы генциан фиолетового или кристаллического фиолетового нестойки,
длительному хранению не подтежат.
3.2.4.27 Красящие бумажки с кристаллическим фиолетовым или генциан фиолетовых! дтя
окраски по Граму, в модификации Синева
Кристаллического фиолетового или генциан фиолетового — 1 г, спирта этилового с массовой
долей 96 % — 100 см3, глицерина —5 см3 смешивают, наливают в лоток или глубокую тарелку.
Бумагу нарезают в виде полосок шириной 2—2,5 см и длиной 30—50 см. Полоску погр\гжают на
несколько секунд в краситель так. чтобы смачивались обе ее поверхности. Окрашенные полоски
вынимают пинцетом, дают красителю стечь и подвешивают на веревке для высушивания. Бумагу
сушат в термостате при температуре (37±l) ’С. Высушенные полоски бумаги разрезают на кусочки
размером 2x2 или 2 х 4,5 см.
479