ГОСТ 30364.2-96
3.3.2.2 Обработка результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
Обнаружение ха среде Эндо характерного роста колоний, наличие в мазках из этих колоний
грамотрнцательных палочек, сбраживающихлактозус образованием кислоты и газа притемпературе
(37±1) "С, указывают на выявление в продукте бактерий группы кишечных палочек.
Результат записывают как «не обнаружены» или «обнаружены* бактерии группы кишечных
палочек в 0,1 см3 жидких или в 0.1 г сухих яичных продуктов.
3.3.3 Метод выявления бактерий рода Salmouellae
Метод основан на использовании сред обогащения с последующим выделением сальмонелл на
дифференциально-диагностических средах, а также на изучении культурально-морфологических,
биохимических и серологических свойств культур.
3.3.3.1 Проведение контроля
25 г сухих или 25 см3 жидких яичных продуктов из средней пробы с соблюдением стериль
ности вносят в колбу, содержащую 225 см3одной из сред обогащения (Кауфмана, магниевой или
селенитовой), встряхивают и инкубируют при температуре (37±1)*С в течение 16—20 ч. Затем
проводят высев бактериологической петлей (диаметр 0,4—0.5 мм) из сред обогащения в чашки
Петри с висмут-сульфитпым агаром или средой Плоскирева, или агаром Левина, растирая
шпателем. Чашки с посевом инкубируют при температуре (37±i)’C. Учет результатов проводят
на висмут-сульфитном агаре через 48 ч, на среде Плоскирева и Левина через 18—24 ч. Сальмо
неллы на висмут-сульфитном агаре образуют черные колонии с характерным металлическим
блеском, при этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка среды под колонией
и нежные светло-зеленые колонии. На средах Плоскирева и Эндо колонии сальмонелл прозрачные,
на среде Левина - голубоватые. При отсутствии типичных или подозрительных колоний или при
наличии слабого роста микробов на плотных дифференциальных средах чашки с посевами
повторно инкубируют при температуре (37±1)*С в течение 20—24 ч. Затем снопа определяют
присутствие колоний сальмонелл. При обнаружении подозрительных колоний продолжают
исследование. В противном случае работу с посевами прекращают.
При наличии подозрительных типичных, характерных для сальмонелл колоний (по 3.3.1.1), из
них берут не менее 3 колоний. Если имеется на одной чашке менее 3 типичных колоний, то берут
все выросшие подозрительные колонии для пересева в пробирки: со скошенным питательным или
мясо-пептонным агаром, с мясо-пептонным бульоном, с пептонной водой и на одну из дифферен
циальных сред Ресселя, Крумвиде-Олькеницкого, Клнглера.
Среды Ресселя, Крумвиде-Олькеницкого, Клипера засевают сначала штрихом на скошенную
поверхность, а затем уколом в глубину столбика.
Посевы инкубируют при температуре (37±1) *С в течение (24±1) ч.
Выросшие культуры с поверхности скошенного агара используют для постановки реакции
агглютинации и приготовления мазков. Мазки окрашивают по Граму и микроскопируют. Сальмо
неллы —неотрицательные палочки. Посевы на мясо-пептонном бульоне и пептонной воде
используют для определения способности выделенных культур образовывать сероводород и индол.
Подтверждение наличия сальмонелл в продукте дает рост на средах Ресселя. Крумвиде-Ольке
ницкого. Клипера.
На средах Ресселя, Крумвиде-Олькеницкого. Клиглера оценивают окраску и газообразование.
При росте сальмонелл в средах Ресселя, Крумвиде-Олькеницкого, Клипера в малиновый цвет
окрашивается столбик (за счет расщепления глюкозы), скошенная часть среды остается бледно-
ро зовой при отсутствии расщепления лактозы, сахарозы или обоих сахаров. Газообразование
устанав ливают по трещинам и разрывам столбиков агара. На средах Крумвиде-Олькеницкого,
Клипера образование сероводорода обнаруживают на основании почернения среды (от темной
линии по месту протокола среды до разлитого почернения всего столбика). Расщепление мочевины
выявляется по восстановлению первоначального цвета (бледно-розового) столбика среды.
Сальмонеллы мочевину не разлагают, сероводород образуют.
При необходимости более полной биохимической характеристики культуры пересеивают на
цветные среды Гисса с углеводами («короткий пестрый ряд* с глюкозой, лактозой, сахарозой,
маннитом и мальтозой) и определяют их способность образовывать индол и сероводород.
С этой целью суточную культуру, взятую со скошенного питательного или мясо-пептонного
агара, растирают в 1.0 см3 физиологического раствора. Затем по 2 капли (0.2 см3) взвеси вносят
пастеровской пипеткой в среды Гисса, пептонную воду или мясо-пептопиын бульон. Питательные
среды с посевами инкубируют при температуре (37±1)*С.
12
50