ГОСТ 30364.2-96
3.2.4.28 Раствор Люгаля для окраски мазков по Граму
2 г йодида калия растворяют в Юсм3дистиллированной воды, прибавляют I г кристалличес
кого йода, оставляют на несколько часов до полного растворения йода, после чего доливают 290 см3
дистиллированной воды. Раствор хранят в химической посуде из темного стекла.
3.2.4.29 Фуксин Циля —карболовый раствор
1 г порошка фуксина растирают в ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и 0.5 см3
(несколько капель) глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 10 см3
этилового спирта с массовой долей % %. После того, как смесь полностью разотрется, прибавляют при
постоянном помешивании 100 см3 дистиллированной воды, выдерживают 2 сут, после чего фильтруют.
Фуксин Циля стойкий, хранится долгое время во флаконе из темного стекла с притертой пробкой.
3.2.4.30 Фуксин Пфейфера, спирто-водный раствор
К I части карболового раствора фуксина Циля прилипают 9 частей дистиллированной воды.
Раствор очень нестойкий, поэтому его готовят в необходимых количествах непосредственно перед
использованием.
3.2.4.31 Сухие среды: питательный агар, висмуг-сульфитный агар, Гисса. дрожжевой экстракт,
Кесслер, желчь крупного рогатого скота, мясо-пептонный бульон. Плоскирева. селенитовую,
Хейфеиа, агар Эндо, агар Клиглера готовят по прописи, указанной на этикетке.
3.2.5 Приготовление мажов по методу Грома
3.2.5.1 Приготовление мазков из культуры в агаризонанпой среде
На середину чистого обезжиренного предметного стекла стерильной пипеткой или петлей
наносят небольшую каплю стерильного изотонического раствора или водопроводной воды. Затем,
соблюдая правила асептики, петлей с плотной питательной средой из пробирки или чашки берут
испытуемую колонию. Часть ее погружают в каплю, слегка растирая в ней, а остаток в петле сжигают на
пламени горелки. Остуженной петлей сначала краем, а потом всей плоскостью петли равномер ными
круговыми движениями распределяют каалю на площади, составляющей примерно ’/з
предметного стекла.
При приготовлении препарата из культуры в жилкой питательной среде бактериологической
петлей или пастеровской пипеткой берут каплю культуры и. поместив ее на середину сухого чистого
стекла, равномерно распределяют ее в форме мазка. Петлю тотчас же обжигают на пламени горелки, а
пастеровскую пипетку погружают в дезинфицирующий раствор.
Приготовленные мазки высушивают при комнатной температуре на воздухе.
Высушенные мазки фиксируют, для чего препарат берут пинцетом за край стекла мазком вверх
и несколько раз проводят его через пламя горелки.
3.2.6 Окраска мажов
3.2.6.1 На предварительно фиксированный пламенем мазок кладут полоску фильтровальной
бумаги, пропитанной кристаллическим фиолетовым или генциан фиолетовым, и на последнюю
наливают дистиллированную воду гак, чтобы бумажка полностью смочилась краской. Прокраши
вание длится 1—2 мин.
3.2.6.2 Фильтровальную бумажку снимают пинцетом, сливают избыток красителя и, не про
мывая препарата водой, наливают на него раствор Люголя на 1—2 мин до почернения мазка.
3.2.6.3 Раствор Люгаля сливают, предметное стекло для обесцвечивания мазка погружают не
сколько раз встаканчик с этиловым спиртом с массовой далей 96 %. Процесс обесцвечивания считается
завершенным, когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости.
Мазок можно обесцвечивать и таким способом: на препарат наливают этиловый ректификованный
спирт с массовой долей % % на 30—60 с. при этом препарат покачивают и доливают спирт.
3.2.6.4 Препарат тщательно промывают водопроводной водой и докрашивают спирто-водным
раствором фуксина (Пфейфера) или I %-ным водным раствором нейтрального красного в течение
1—2 мин. Краску сливают, мазок промывают водопроводной водой, сушат на воздухе или фильт
ровальной бумагой и микроскопируют. При этом учитывают морфологические особенности
изучаемых бактерий и их отношение к окраске: грамположительные бактерии окрашиваются
основной краской в темно-фиолетовый цвет, гра.мотрнцательные, воспринимая дополнительную
окраску, приобретают ярко-розовый цвет.
3.3 П оря док провед ения контроля
3.3.1Методопределения количества мехн/нивных аэробных и факультативно-анаэробных микро
организме
Метод основан на подсчете всех колоний мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных
микроорганизмов, вырастающих на плотном питательном агаре, it пересчете их количества на 1 г
сухого (1 см3 жидкого) яичного продукта.
10
48