ГОСТ Р 52377—2005
7.13 Определение наличия примеси пшеницы мягких сортов в макаронных изделиях группы А
В основе метода анализа лежат иммунохимические реакции, в которые вступают антитела к белку
фриабилину, присутствующему только в пшенице мягкихсортов.
Метод определения наличия пшеницы мягких сортов в макаронных изделиях является экспресс-
методом. при возникновении спорных вопросов руководствуются (2].
7.13.1 Аппаратура
Тест-система PASTASCAN*. состоящая из:
планшета микротитровального. 96лунок;
реагента кумасси голубого, флакон 15 см3;
полосок мембранных, в тубе 20 шт;
буфера для экстракции, флакон 50 см3;
буфера моющего концентрированного, флакон 100см3(зеленая этикетка);
пробирок для инкубации вместимостью 3см3с блокирующим реагентом. 60 мг. 20 шт.
пробирок микроцентрифужных вместимостью 1.5см3.80 шт в пакете;
контрольныхобразцов макаронных изделий, полученных из;
-100 % твердой пшеницы, обработанной при 100 °С;
- 3 % мягкой пшеницы, обработанной при 100 °С;
- 3% мягкой пшеницы, обработанной при 60 *С;
коньюгата (красная этикетка), флакон-капельница 1см3;
красящего реагента (голубая этикетка), флакон 30см3.
Весы лабораторные с допускаемой погрешностью взвешивания ± 0.05 г по ГОСТ 24104.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Цилиндры мерные вместимостью 50см3по ГОСТ 25336.
Центрифуга, обеспечивающая скорость перемешивания 5000об/мин.
Пипетки, обеспечивающие объемдозирования 5.100,150.500 мкл.
Бумагафильтровальная по ГОСТ 12026.
Часы по ГОСТ 3145.
Допускается применение другой аналогичной аппаратуры, технические и метрологические характе
ристики которой не уступают указанным выше.
7.13.2 Подготовка к проведению анализа
7.13.2.1 Готовят моющий буферпутем разбавления 5 см3 концентрированного моющего буферного
раствора в 45 см3дистиллированной воды в расчете на одну мембранную полоску.
7.13.2.2 Из полученной по6.2.1.2 лабораторной пробы макаронных изделий отбирают одну пробу для
анализаитри контрольных образца, массойпо0,10 гкаждый. Помещают отобранные пробы в микроцектри-
фужиые пробирки,добавляя вкаждую изних по 500 мкл экстрагирующего буфера, закрывают их крышка
ми и перемешивают втечение 1мин. После этого оставляют пробирки в покое на 3мин. поистечении этого
времени перемешивают еще раз в течение 1мин. Центрифугируют в течение 5 мин при 5000 об/мин.
7.13.2.3Для выбора контрольного образца проводят оценку температуры сушки пробы. В каждую
лунку микротитровального планшета переносят по 10 мкл каждого экстракта, полученного по 7.13.2.2,
добавляют по 100 мкл дистиллированной воды и по 150 мкл реагента кумасси голубого. Интенсивность
окраски растворов в лунках оценивают визуально. Для дальнейшегоанализа выбирают контрольный обра
зец. показавший результат интенсивности окраски, близкий к результату, полученномудля исследуемой
пробы.
7.13.3 Проведение анализа
На белую абсорбирующую поверхность мембранной полоски пипеткой наносят по5 мкл экстрактов
лабораторной пробы, приготовленной по6.2.1.2.100 %-ного контрольного образца, выбранного 3%-ного
контрольногообразца (наоднумембранную полоску рекомендуется помещатьдо четырех проб во избежа
нии их смешивания) идают впитаться в течение 5 мин.
В пробиркудля инкубации с блокирующим реагентом добавляют 3 мм приготовленного по 7.13.2.1
моющего буфера, закрывают ее крышкой и перемешивают в течение 1 мин. В пробирку для инкубации
погружают мембранную полоску мембраной вниз иинкубируют в течение 5 мин. периодически перемещая
полоску в растворе.
Извлеченную из пробирки мембранную полоску кладут на фильтровальную бумагу. В пробиркудля
инкубации сблокирующим реагентомдобавляют одну каплюконьюгата. закрывают пробирку и перемеши
вают. Туда помещают мембранную полоску мембраной вниз иинкубируют втечение 20 мин. периодически
перемещая полоску в растворе.
91
13