15
9.3 Метод определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae — (подсчет
колоний)
- Приготовление исходного и десятикратных разведений — по ГОСТ Р 51426 и ГОСТ 26669.
- Метод определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae посевом в агаризованную среду
- Для посева жидкого продукта или исходного разведения не жидкого продукта или их разведений используют по две чашки Петри для продукта и каждого его разведения. Переносят стерильной пипеткой 1 см3 продукта или разведения в центр каждой чашки. Для посева в чашкуПетри продукта и каждого его разведения используют отдельную стерильную пипетку.
- В каждую чашку Петри (9.3.2.1) наливают около 15 см3 одной из сред (6.2, 6.7), охлажденной до температуры 44 °С—47 °С. Время, прошедшее между посевом продукта и/или его разведения в чашку Петри и заливкой среды, не должно превышать 15 мин.
Аккуратно перемешивают инокулят со средой и оставляют смесь для застывания, для этого чашки Петри помещают на холодную горизонтальную поверхность.
В качестве арбитражной среды используют VRBG-агар.
Одновременно для контроля стерильности агаризованной среды в стерильную чашку Петри наливают приблизительно 15 см3 среды и инкубируют вместе с посевами.
- В случае ожидаемого ползучего роста допускается наслаивание второго слоя среды. Для этого после застывания среды в чашках Петри на ее поверхность наливают около 4 см3 использованной агаризованной среды (6.2, 6.7) температурой 44 °С—47 °С. Добавленная среда должна затвердеть.
- Метод определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae посевом на агаризованную среду
- При определении количества бактерий семейства Enterobacteriaceae посевом на агари- зованные селективно-диагностические среды (6.2, 6.7) по 0,1 или 0,2 см3 продукта или его разведения наносят на поверхность одной из этих сред, разлитых в чашки Петри по две для каждой пробы продукта для анализа или ее разведения. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ26670.
При применении метода мембранных фильтров фильтры после фильтрации переносят на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, избегая образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
Примечание — Пункт 9.3.3 введен дополнительно в связи с включением в настоящий стандарт метода посева на поверхность питательных сред (раздел 1).
- Переворачивают крышкой вниз чашки Петри с посевами по 9.3.2.3 и 9.3.3.1 и инкубируют в термостате при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
- Подсчет количества колоний
После инкубации по 9.3.3.2 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний. Посевы просматривают, отмечают рост типичных колоний и подсчитывают их количество.
Характеристика типичных колоний — по 9.1.5.
- Подтверждение принадлежности бактерий из типичных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae
Отбирают не менее чем по три типичные колонии. Каждую отобранную колонию пересевают на поверхность питательного агара. Посевы термостатируют при температуре (37 + 1)°C в течение (24 + 2) ч.
Подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae проводят по 9.1.6.
- Допускается также выявление бактерий семейства Enterobacteriaceae проводить посевом в или на агаризованную среду при условии, что навеску продукта, в которой предусматривается выявление, возможно посеять по этому методу.
При выявлении бактерий семейства Enterobacteriaceae посевом в или на агаризованную среду подсчета количества выросших колоний не проводят.
Примечание — Пункт 9.3.6 введен дополнительно в связи с тем, что выявление бактерий семейства Enterobacteriaceae в определенной пробе для анализа возможно проводить в Российской Федерации путем посева этой пробы в или на агаризованные среды.
- Подсчет и выражение результатов
Если при подтверждении типичных колоний в двух из трех или трех из трех отобранных колоний