13
Примечание — Раздел 8 введен дополнительно в соответствии с требованиями национальной стандартизации.
- Проведение испытания
- Метод выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae
- Приготовление исходного и десятикратных разведений — по ГОСТ Р 51426 и ГОСТ 26669.
- Предварительное обогащение в неселективной среде
В зависимости от предполагаемой обсемененности продукта бактериями семейства Enterobacteriaceae или нормативных значений х см3 жидкой пробы или х см3 исходной суспензии при испытании не жидких продуктов и/или их разведений переносят в пробирку, содержащую забуференную пептонную воду. Соотношение количества высеваемого продукта и забуференной пептонной воды соответственно 1:10.
Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (18 + 2)ч.
- Обогащение в селективной жидкой среде
Пробирку с селективной средой инокулируют 1 см3 из пробирки, полученной по 9.1.2, и инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
При непосредственном посеве продукта в селективную среду в зависимости от требуемых пределов выявления х см3жидкой пробы или х см3 исходной суспензии при использовании других продуктов переносят в пробирку, содержащую 10 см3 обогатительной селективной среды двойной концентрации для 1 см3 <х < 10 см3, или в пробирку, содержащую 10 см3 обогатительной селективной среды нормальной концентрации для х < 1 см3.
При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижениярН (на 0,5 и более) питательных сред рН питательных сред после внесении в них продукта или его разведения доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ 10444.1, или при приготовлении питательных сред рН устанавливают выше заданного с учетом его последующего снижения при внесении продукта. Количество добавляемого стерильного раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить рН при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.
Допускается доводить рН до нейтрального значения с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия непосредственно в высококислотном продукте.
Посевы непосредственно в селективную среду инкубируют в течение 24—48 ч, через 24 ч проводят предварительный учет роста бактерий в среде, а через 48 ч — окончательный.
Примечание — Дополнение введено в связи с тем, что подкисление сред в Российской Федерации проводят для создания оптимальных условий для роста микроорганизмов.
- Выделение типичных колоний
Используя петлю, пересевают культуры с селективной питательной среды с признаками роста на поверхность одной из селективно-диагностических сред, приготовленных по 6.2 или 6.7.
Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
- Выбор колоний для подтверждения
После инкубирования посевов по 9.1.4 отмечают рост типичных колоний.
На глюкозном агаре с желчью и фиолетовым красным бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии розовые, красные или пурпурные (с ореолом или без него).
На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии темно-красные с металлическим блеском или без него, розовые, прозрачные.
Из каждой инкубированной чашки (см. 9.1.4), на которой обнаружены типичные колонии, выбирают по три хорошо изолированных колоний каждого типа и пересевают каждую отобранную колонию отдельно на поверхность питательного агара.
Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
- Подтверждение принадлежности типичных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae
Принадлежность выросших культур к бактериям семейства Enterobacteriaceae подтверждают по отношению к окраске по Граму, отсутствию оксидазы и по ферментации глюкозы.
- Окраска по Граму
Приготовление мазков из культур, выросших на скошенной поверхности питательного агара, и окраску их по Граму проводят поГОСТ 30425.
Бактерии семейства Enterobacteriaceae — грамотрицательные палочки.
Допускается окраску по Граму заменять тестом Грегорсена, для этого на предметном стекле в