14
капле 3 %-ного водного раствора калия гидроокиси эмульгируют культуру микроорганизмов, взятую из колонии с агаризованной среды. Если через несколько секунд взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, то это указывает на принадлежность испытуемой культуры к грамотри- цательному виду. У грамположительных бактерий слизистых нитей не образуется.
Примечание — Пункт 9.1.6.1 введен дополнительно в связи с тем, что бактерии семейства Enterobacteriaceae это, прежде всего, грамотрицательные бактерии, а при идентификации переходят от общих признаков к частным, поэтому прежде всего необходимо определить отношение выявленных бактерий к окраске по Граму.
- Определение отсутствия оксидазы
Используя платиново-иридиевую петлю (проволоку) или никель-хромовую или стеклянную палочку, отбирают культуры, выросшие на поверхности питательного агара (см. 9.1.5) и наносят штрихами на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазы (6.11).
Результат испытания считают отрицательным, если фильтровальная бумага на месте нанесения штрихов не посинела в течение 10 с.
- Определение ферментации глюкозы
Для определения ферментации глюкозы испытуемую культуру высевают уколом в глюкозный агар (6.4) или среду Гисса с глюкозой (6.8). Посевы термостатируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2)ч.
Бактерии семейства Enterobacteriaceae ферментируют глюкозу с образованием только кислоты (цвет среды меняется) или кислоты и газа.
- По результатам дополнительного подтверждения к бактериям семейства Enterobacteriaceae относят факультативно-анаэробные, не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, сбраживающие глюкозу с образованием кислоты или кислоты и газа.
- Метод НВЧ-определение количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
- Приготовление исходного разведения и десятикратных разведений — по
ГОСТР 51426 и ГОСТ26669.
Готовят достаточное число разведений по ГОСТ26669, гарантируя, что все пробирки, соответствующие конечному разведению, покажут отрицательный результат.
- Инокуляция и инкубация
- Используют потри пробирки для каждой пробы продукта для анализа и/или его разведения.
- Предварительное обогащение в неселективной среде
Посевы для предварительного обогащения проводят с учетом требований 4.2.1.
Например, в каждую из трех пробирок с 9 см3 забуференной пептонной воды вносят по 1 см3 продукта, если анализируемый продукт жидкий, или вносят по 10 см3 исходного разведения не жидкого продукта в колбу с 90 см3 забуференной пептонной воды.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 забуференной пептонной воды вносят по 1 см3 первого десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 исходного разведения продукта, в случае не жидкого продукта.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 забуференной пептонной воды вносят по 1 см3 второго десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 первого десятикратного исходного разведения продукта в случае не жидкого продукта.
Каждое последующее разведение высевают, используя новую стерильную пипетку. Осторожно перемешивают инокулум и среду.
Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (18 + 2)ч.
- Обогащение в селективной жидкой среде
Пробирки с селективной средой инокулируют 1 см3 из каждого посева, полученного по 9.2.3, и инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
Посев непосредственно в селективную питательную среду проводят в соответствии с 9.1.3.
- Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae
Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae проводят по 9.1.4—9.1.6.
Наиболее вероятное число бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 см3 или 1 г пробы продукта (НВЧ) рассчитывают исходя из числа посевов, в которых подтверждено присутствие этих бактерий. Для определения наиболее вероятного числа пользуются таблицей ДБ.1 приложения ДБ. Для примера, приведенного в 9.2.3, полученные табличные значения делят на десять, так как высевали 1 г (10°), 0,1 г (10-1) и 0,01 г (10-2), а масса (объемы) проб для анализа, выбранные для посева, отличаются от табличных значений в десять раз.