ГОСТ Р 54386—2011
дистиллированной воде по ГОСТ 6709 в мерной колбе вместимостью 1000 см
3
по ГОСТ 1770. Объем
раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.
6.4.2 Приготовление раствора субстрата
n-Нитрофенил-
α
-D-глюкопиранозид по 6.3.16 массой (3,0126 ± 0,0001) г растворяют в буферном
растворе, приготовленном по 6.4.1, нагревая до температуры не выше (60 ± 1) °С, в мерной колбе вме-
стимостью 500 см
3
по ГОСТ 1770. Раствор быстро охлаждают до комнатной температуры и доводят до
метки буферным раствором, перемешивают.
Раствор хранят в склянке из темного стекла при температуре 4 °С в течение 30 сут.
6.4.3 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 3 моль/дм
3
Соляную кислоту по ГОСТ 3118 объемом 270 см
3
осторожно, при перемешивании, приливают к
300 см
3
дистиллированной воды по ГОСТ 6709 в мерную колбу вместимостью 1000 см
3
по ГОСТ 1770.
Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.
6.4.4 Приготовление фиксирующего раствора (pH = 9,5)
Трис-(гидроксиметил)аминометан по 6.3.17 массой (36,34 ± 0,01) г растворяют в дистиллирован-
ной воде по ГОСТ 6709 в мерной колбе вместимостью 100 см
3
по ГОСТ 1770. Добавляют раствор соля-
ной кислоты молярной концентрацией 3 моль/дм
3
, приготовленный по 6.4.3, в объеме, достаточном для
установления значения pH раствора (9,5 ± 0,1) ед. pH (по pH-метру по 6.3.5). Объем раствора в колбе
доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.
6.4.5 Приготовление раствора мeда
В стакан вместимостью 50 см
3
по ГОСТ 25336 взвешивают навеску мeда, подготовленного по 6.1,
массой (4,00 ± 0,01) г. К навеске приливают 5 см
3
буферного раствора, приготовленного по 6.4.1, мeд
тщательно растирают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 25 см
3
по ГОСТ 1770. Обработку пробы повторяют два-три раза до полного растворения мeда, затем стакан
несколько раз обмывают небольшими порциями буферного раствора, которые также сливают в мерную
колбу. Объем раствора в колбе доводят до метки буферным раствором, перемешивают.
Раствор хранят при температуре 4 °С в течение 24 ч.
6.5 Проведение испытаний
6.5.1 В две мерные колбы вместимостью 25 см
3
по ГОСТ 1770 вносят по 5 см
3
раствора суб-
страта, приготовленного по 6.4.2. Колбы помещают в термостат или на водяную баню по 6.3.4 с ре-
гулятором температуры, установленным на температуру (40,0 ± 0,2) °С. Через 5 мин выдерживания
при температуре (40,0 ± 0,1) °С в первую колбу добавляют 0,5 см
3
раствора меда, приготовленного по
6.4.5, и начинают отсчет времени по секундомеру по 6.3.7. Перемешивают содержимое колбы (рабо-
чий раствор) в течение 10 с, вновь помещают колбу в термостат или на водяную баню температурой
(40,0 ± 0,1) °С. Через 20 мин в обе колбы добавляют по 0,5 см
3
фиксирующего раствора, приготовленно-го
по 6.4.4, смеси в колбах перемешивают в течение 10 с. Во вторую колбу добавляют 0,5 см
3
раствора
меда, приготовленного по 6.4.5, смесь (контрольный раствор) вновь перемешивают. Контрольный рас-
твор готовят для каждого образца меда.
6.5.2 После охлаждения растворов до комнатной температуры измеряют оптическую плотность
(D) рабочего раствора по отношению к контрольному раствору на спектрофотометре по 6.3.1 при длине
волны
λ
= 400 нм в течение 60 мин. Оптическую плотность раствора определяют не менее трех раз.
Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности рабочего раствора при усло-
вии, если абсолютное расхождение (D
ма
к
с
– D
мин
) результатов трех определений не превосходит зна-
чения критического диапазона CR
0,95
(3), приведенного в таблице 1. При невыполнении этого условия
проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.
Таблица 1
Диапазон измерений оптической плотности D
Критический диапазон CR
0,95
(3)
От 0,101 до 1,007 включ.
6.5.3 При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.
4
0,02D