ГОСТ Р 54386—2011
6 Метод определения активности сахаразы
6.1 Отбор и подготовка пробы
Пробу меда массой не менее 200 г отбирают по ГОСТ 19792.
Закристаллизованный мед размягчают в термостате или на термостатируемой водяной бане по
6.3.4 при температуре не выше 40 °С. Пробу охлаждают до комнатной температуры.
Мед с примесями процеживают при комнатной температуре через сито по 6.3.6. Закристалли-
зованный мед продавливают через сито шпателем по 6.3.8. Крупные механические частицы удаляют
вручную.
Сотовый мед (без перговых ячеек) отделяют от сот при помощи сита без нагревания.
Пробу интенсивно и тщательно перемешивают не менее 3 мин. При гомогенизации следует об-
ратить внимание на то, чтобы меньше воздуха попало в мед.
6.2 Сущность метода
Метод основан на фотометрическом определении количества продукта расщепления субстрата
в условиях проведения ферментативной реакции и последующем вычислении активности сахаразы
(
α
-глюкозидазы, инвертазы) меда и инвертазного числа.
1 мкмоль субстрата, расщепленного сахаразой за 1 мин при оптимальных для ферментативной
реакции условиях (значение pH, температура), соответствует 1 ед. активности.
Инвертазное число характеризует активность сахаразы меда.
Инвертазное число показывает массу сахаразы (в граммах), расщепленную содержащимися в
100 г меда ферментами за 1 ч при условиях испытания.
6.3 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
24
24
6.3.1 Спектрофотометр, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине вол-
ны 400 нм и кюветами с четырьмя прозрачными стенками и длиной оптического пути 10 мм.
6.3.2 Весы по ГОСТ Р 53228 высокого класса точности с пределами допускаемой абсолютной по-
грешности не более ± 0,1 мг.
6.3.3 Термометр ртутный стеклянный лабораторный с диапазоном значений от 0 °С до 100 °С и
ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
6.3.4 Термостат, водяная баня или другое устройство, позволяющее проводить равномерный
нагрев до температуры 60 °С.
6.3.5 pH-метр/иономер с пределами допускаемой основной абсолютной погрешности прибора
при преобразовании измеренного значения ЭДС в pX (pH) ± 0,02 ед. pX (pH).
6.3.6 Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм по ГОСТ Р 51568.
6.3.7 Секундомер механический СОСпр-26-2-000.
6.3.8 Шпатель лабораторный ШЛ.
6.3.9 Палочки стеклянные лабораторные оплавленные длиной от 15 до 20 см.
6.3.10 Стаканы В 1-50 ТС по ГОСТ 25336.
6.3.11 Цилиндры мерные 1-500-2 по ГОСТ 1770.
6.3.12 Колбы мерные 1(2)-25(100,500,1000)-2(ПМ) по ГОСТ 1770.
6.3.13 Пипетки 1-2-1-1(5) по ГОСТ 29227.
6.3.14 Калий фосфорнокислый однозамещенный (КН РО ) по ГОСТ 4198, х.ч.
6.3.15 Натрий фосфорнокислый двузамещенный (Nа НРО ) по ГОСТ 11773, х.ч.
6.3.16 n-Нитрофенил-
α
-D-глюкопиранозид с содержанием основного вещества не менее 98,0 %.
6.3.17 Трис-(гидроксиметил)аминометан с содержанием основного вещества не менее 99,9 %.
6.3.18 Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.
6.3.19 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по ме-
трологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.
Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.
6.4 Подготовка к испытаниям
6.4.1 Приготовление буферного раствора (pH = 6,0)
Калий фосфорнокислый однозамещенный (КН
2
РО
4
) по ГОСТ 4198 массой (11,66 ± 0,01) г и на-
трий фосфорнокислый двузамещенный (Nа
2
НРО
4
) по ГОСТ 11773 массой (2,04 ± 0,01) г растворяют в
3