ГОСТ Р 51650-2000
Раствор бенз(а)пирена в н.октане переносят в пробирку. Объем раствора не должен превышать
5 см3 при исходной навеске продукта 25 г.
В полученном растворе (экстракте) определяют содержание бенз(а)пирена методом низкотем
пературной спектрофлуориметрин, используя для количественной оценки метод добавок или метод
внутреннего стандарта.
4.3.2 Определение содержания бенз(а)пирена в растворе (экстракте), полученном по 4.3.1,
методом добавок.
В три пробирки наливают пипеткой по I см3 полученного раствора 6енз(а)пирена в н.октане.
Затем в первую пробирку приливают 2 см3 н.октапа. Во вторую пробирку приливают 1,5см3 н.октана
и 0.5 см3рабочего раствора бенз(а)пирена массовой концентрации 0.1 мкг/см3, приготовленного по
4.2.5. В третью пробирку вносят 1 см3 н.октапа и 1 см3 того же рабочего раствора бенз(а)пнрена,
что и во вторую пробирку.
Спектрофлуориметрический анализ начинают с третьей пробирки. Для этого третью пробирку
помещают в сосуд Дьюара с жидким азотом перед входной щелью спектрофотометра; устанавливают
аналитическую линию флуоресценции бенз(а)пирена 403 нм при длине волны возбуждающего света
367 нм. Регулировкой коэффициента усиления и раскрытием щели, а также одновременной юсти
ровкой пробирки всосуде Дыоара добиваются максимального сигнала по регистрирующему прибору
спектрофотометра (до 50 —80 %), после чего записывают спектрограмму бенз(а)пирена в области
401 —404 нм. фиксируя значение регистрирующего прибора спектрофотометра при длине волны
401 нм. Запись спектра повторяют дважды.
Затем последовательно замораживают вжидком азоте вторую и первую пробирки и записывают
спектры флуоресценции в области дзин волн 401 —404 нм. обязательно выставляя перо самописца
при дтине волны 401 нм в то же положение, что при сканировании пробы в третьей пробирке.
Массовую концентрацию бенз(а)пнрена в анализируемом экстракте определяют по графику,
на котором по оси абсцисс откладывают значение добавки бенз(а)пирена (мкг), а по оси ординат —
высоту пика максимума характеристической линии бенз(а)пирена при 403 нм. измеренную по
полученным спектрограммам в миллиметрах.
Если массовая концентрация бенз(а)пирена в исследуемом растворе попадает в область,
пригодную для измерений, то полученные экспериментальные точки лежат на одной прямой.
Экстраполяция этой прямой до пересечения с осью абсцисс дает на ней отрезок, соответствующий
содержанию бенз(а)пирена в растворе без добавки, т. е в 1см3исследуемого раствора. В случае, если
массовая концентрация бенз(а)пирена в анадизируемом растворе выше верхнего предела диапазона
измеряемых прибором концентраций, то проводят разбавление анадизируемого раствора н.октаном.
4.3.3 Определение содержания бенз(а)пирена в растворе (экстракте), полученном по 4.3.1,
методом внутреннего стандарта
В качестве внутреннего стандарта используют 1,12-бензпернлен. В пробирку надивают 3 см3
раствора бенз(а)пирена в н.октане, полученного по 4.3.1, и помещают в сосуд Дьюара с жидким
азотом перед входной щелыо спектрофотометра, устанавливают аналитическую линию 403 нм при
длине волны возбуждающего света 367 нм и проводят запись спектра раствора в области длин
волн 401 —409 нм. По интенсивности линии (по высоте пика максимума характеристической
линии бенз(а)нирена при 403 нм) оценивают приблизительное содержание бенз(а)пирена в пробе. В
соответ ствии с этой оценкой далее в пробирку с 3 см3 раствора бенз<а)пирена в и.октане
добавляют раствор 1.12-бензперилена в таком количестве, чтобы в спектре пробы интенсивность 1.12-
бензперилена при 406.3 нм была в 3 —5 раз больше интенсивности линии бенз(а)пирена при длине
волны 403 нм.
Проводят запись спектра в интервале длин волн 401 —409 нм дважды.
Интенсивности характеристических линий бенз(а)пнрена при 403 нм и 1.12-бензперилена при
406.3 нм (Н, и Н2 соответственно) определяют по спектрограммам, измеряя высоты пиков в
максимумах характеристических линий этих соединений в миллиметрах. В расчетах принимают
среднюю величину. Рассчитывают коэффициент отношения (К) интенсивности линии бензапире
на (//,) к интенсивности линии 1,12-бензперилена (//,). К= Н\/Нг.
Далее определяют этот коэффициент для стандартных растворов бенз(а)пирена (AfCT). Для этого
вдве пробирки наливают по 3 см3стандартных растворов бенз(а)пирена с массовой концентрацией
0,02 и 0.04 мкг/см3. В каждую из пробирок наливают такое же количество 1.12-бензперилена, что и в
пробирку с пробой. Проводят дважды запись спектров каждого раствора в интервале длин волн 401
_ 409 нм.
При этом обязательно следят за тем, чтобы положение пера самописца при длине волны 401 нм
во всех случаях фиксировалось на одном уровне.
5