ГОСТ Р 51650-2000
потоком воздуха через вакуумный алонж, соединенный с водоструйным насосом, остаток в колбе
растворяют в 0,5 см3 этилового спирта.
В стакан вместимостью 100 см3 отвешивают (2,5 ± 0,2) г сефадекса LH-20, добавляют 20 см3
этилового спирта и оставляют для набухания на 3 —4 ч. Затем гель переносят, смывая небольшим
количеством спирта, в стеклянную хроматографическую колонку, дают растворителю стечь таким
образом, чтобы слой спирта над слоем сорбента оставался не ниже 2 мм. На подготовленную
колонку наносят пипеткой остаток экстракта из колбы, трижды смывая его из колбы этиловым
спиртом порциями по 0,5 см3. Элюирование из колонки полициклических ароматических
углеводородов, в том числе бенз(а)пирена, проводят 40 см3 этилового спирта, первую фракцию
объемом 12 см3 отбрасывают, собирают вторую фракцию объемом 25 см3. Скорость
элюирования растворителя 0,5 см3/мин обеспечивают, создавая небольшое избыточное давление
потоком воздуха или азота через насадку, соединенную с воздуходувкой или газовым баллоном.
Газ следует подавать через стеклянную трубку, заполненную силикагелем.
Колонку с сефадексом LH-20 можно использовать многократно. Ятя этого, не допуская
высыхания сорбента после фракционирования, колонку промывают 25 см3 этилового спирта и
наносят следующую пробу.
Раствор второй фракции переносят в грушевидную колбу вместимостью 50 см3, растворитель
упаривают до объема 0,5 — 1,0 см3, его остаток удаляют в потоке воздуха или азота.
Полученную фракцию, содержащую бенз(а)пирен, далее анализируют с помощью высокоэф
фективной жидкостной хроматографии или спектрофлуорнметрическнм методом.
Одновременно проводят контрольный опыт, проводя все стадии анализа с использованием
реактивов согласно методике, но без навески продукта.
5.3.2Определение содержания бенз(а)пнрена методом высокоэффективной жидкостной хро
матографии
5.3.2.1 Условия хроматографии
Условия хроматографии подбираются в зависимости от вида применяемого жидкостного
хроматографа и хроматографической колонки.
В качестве примера могут быть приведены следующие условия хроматографического опреде
ления бенз(а)пирена.
Жидкостный хроматограф *Altex-334* с флуоресцентным детектором -Kratos FS-970».
Колонка Supelcosil LC-PAM зернением 5 мк, длиной 150 мм, диаметром —4.6 мм.
Флуориметрическнй детектор: длина волны возбуждающего света 300 нм,
эмиссионный
фильтр —418 нм.
Подвижная фаза: ацетонитрил и вода в объемном соотношении 8:2.
Скорость элюирования —2.0 см3/мин.
Объем вводимой пробы —20 мкл.
Чувствительность усилителя подбирают таким образом, чтобы интенсивность сигналов
бенз(а)пирена и внутреннего стандарта —бенз(в)хриэена не превышала 95 % шкалы.
Время анализа — 15 мин: время удерживания бенз(а)пнрена —5 мин, бенз(в)хризена —13 мин.
Анализируемые растворы хроматографируют дважды в одинаковых условиях. Плошали пиков
измеряют с помощью интегратора или вручную как произведение высоты пика и его ширины на
половине высоты.
Определение содержания бенз(а)пирена проводят методом внутреннего стандарта или методом
добавок.
5.3.2.2 Определение содержания бенз(а)пирена в растворе (экстракте), полученном по 5.3.1,
методом внутреннего стандарта
При использовании такого способа количественной оценки предварительно проводят градуи
ровку хроматографа, используя градуировочные растворы, приготовленные по 5.2.5.
Вусловиях, указанных в5.3.2.1, записывают потрихроматограммыдля каждого изприготовленных
растворов и измеряют площади пиков бенз(а)пирена и бенз(в)хризена. Определяют среднеарифмети
ческое значение плошали пиков бенз(а)пнрена и бенз(в).\рнзепа, рассчитанное из трех хроматограмм.
Градуировочный коэффициент К вычисляют по формуле
* =
/71^ •Oj
‘7>
где т , и т2 —массы введенных в хроматограф бенз(а)пнрена (/и,) и бенз(в).\ризена (т2).мкг;
.У, и S2—площади пиков бенз(а)пирена ($,)и бенз(в)хризена (,У2), см3.
II