ГОСТ Р 51650-2000
5.3.3Определение содержания бенз(а)пирена методом спектрофлуориметрии при комнатной
температуре
При определении содержания бенз<а)п11рена методом спектрофлуориметрии одновременно с
пробой продукта анализируют пробу контрольного опыта, в которую добавлено 50 мкл раствора
бенз(а)пирена массовой концентрации 1мкг/см3.
Полученные по 5.3.1 фракции, содержащие бенз(а)пирен. из пробы продукта и пробы кон
трольного опыта с добавкой, растворяют в 0,5 см3 бензола и далее подвергают дополнительной
очистке в тонком слое ацетилированной целлюлозы.
Для этого пластинку 20 х 20 см, подготовленную, как указано в 5.2.2, делят на два поля:
боковое—шириной 1,5 —2 см и основное, проводя по слою сорбента скальпелем или тонким
шпателем разделительную полосу. На основное поле сплошной полосой, отступив 2 см от нижнего
края пластинки и no I см с боковых краев, наносят раствор фракции, выделенной по 5.3.1. Раствор
наносят с помощью топко отгянутого капилляра или микрошприца, размер пятен не должен
превышать 5 мм. Для количественного переноса вещества его дважды смывают со стенок колбы
небольшим количеством бензола (0,4 —0,6 см3). На стартовую линию бокового поля наносят вточку 5
мкл раствора бенз(а)пирена массовой концентрации 1мкг/см3. После полного испарения раство
рителя пластику помещают в предварительно насыщенную хроматографическую камеру под углом
70* —85" и проводят элюирование в смеси этилового спирта, ацетона и воды, взятых в соотношении
60:25:15. Когда фронт растворителя достигнет 2 см от верхнего края пластинки, ее вынимают из
камеры, высушивают на воздухе и прояазяют хроматографическую зону бенз(а)пирена под лампой
ультрафиолетового облучателя. Сорбент из зоны бенз(а)пирена с основного поля с помошью
скальпеля или тонкого шпателя соскабливают с пластинки и переносят на стеклянный фильтр, с
которого вещество элюируют в несколько приемов 50 см’ бензола в колбы вместимостью 100 см3,
далее растворитель упариваютдо небольшогообъема, остаток растворителя удаляют потоком воздуха
и добавляют в колбу 1см3 бензола.
На спектрофлуорнметре при длине волны возбуждающего света 386 нм в диапазоне 400 —
440 нм при скорости сканирования 60 нм/мин записывают спектры флуоресценции пробы продукта
и пробы контрольного опыта с добавкой бенз(а)пирена.
Спектры растворов записывают в одном режиме усиления, регулируя щель и коэффициент
усиления по раствору контрольной пробы так, чтобы сигнал бенз(а)пирена при 406 нм составлял
0,4 —0.6 шкаты прибора. Ятя каждого раствора спектр записывают дважды, добиваясь хорошей
воспроизводимости. На полученных спектрограммах в максимуме при 406 нм измеряют в милли
метрах высоту спектральной линии бенз(а)пнренадля пробы продукта и пробы контрольного опыта.
Рассчитывают среднее значение высот бенз(а)пирена по данным двух спектрограмм. При высоких
уровнях содержания бенз(а)пирена в продукте пробы разбавляют бензолом и вновь записывают
спектр в том же режиме усиления, что и дтя контрольной пробы.
Проводят два параллельных определения.
5.4 Обработка результате
5.4.1 Массовую долю бенз(а)пирена в продукте Л’,, %, или Х2, мг/кг, при использовании метода
высокоэффективной жидкостной хроматографии вычисляют по формулам:
Д|/и ПШ ГГЮО
т
У = (”f|
-
~
Х
т’-} •100
“
<>я1 -
,|и*
(10)
i/и, ~ т2)<|1)
где /и, — масса бенз(а)пнрена в пробе продукта, мкг;
т2— масса бенз(а)пнрена в пробе контрольного опыта, мкг;
т — масса продукта, взятая для анализа, г.
5.4.2 Массовую долю бенз(а)пирена в продукте Л’,, %, или Л’,, мг/кг, при использовании метода
спектрофлуориметрии вычисляют по формулам:
.
У —’ 1
- vl
.in-4’l*■‘I
IU »
Л_ Н
V
■100
1 7
0
7 /н кш •muo
1
C
с..
И
У
‘н
l
•///
13