ГОСТ 30425-97
В.4 Оптимальные условия для развития строгих анаэробов создают в анаэростатах. снабженных специ
альными препаратами, поглощаюшнми кислород, за счет реагирования его с водородом, выделяющимся при
увлажнении препарата водой в присутствии платины, палладия или других катализаторов.
В.5 Для создания анаэробных условий за счет химического поглощения кислорода воздуха в герметичных
сосудах используют основной раствор пирогаллола. Дтя поглощения кислорода из 100 см5воздуха применяют
смесь 10 см’ раствора гидроокиси натрия c(NaOH) — 2,5 модь/дм1 и I г пирогаллола, приготоатенную после
помещения посевов в сосуд непосредственно перед его герметизацией.
В.6 Для создания анаэробных условий непосредственно в посевах на чашках Петри на внутреннюю
поверхность крышки с помощью липкой бумаги прикрепляют бумажный пакет 4x7 см, содержащий 2 г сухой
смеси, состоящей из пирогаллола, карбоната калия и талька в соотношении 3:3:15. Затем чашку Петри герме-
тизируют, смазывая края крышки пластилином или другими герметизирующими материалами.
В.7 Анаэробные условия создают с помощью бактерий, сильно поглощающих при роете кислород,
например Serratia marccscens.
Одну патовину чашки Петри с агзризованной средой засевают исследуемым материалом, а другую —
бактериями, поглощающими кислород (способ Фортнера). Чашки Петри герметизируют, как указано в В.6.
При выборе условий анаэробного культивирования учитывают устойчивость определяемого микроорга
низма к парциальному давлению кислорода и требуемое для его развития значение окислительно-восстанови
тельного потенциала среды.
ПРИЛОЖЕНИЕ Г
(ре комендуемое)
Тесты дляопределения принадлежности микроорганизмов
к определенной группе
Г.1 Определение каталазной активности
Присутствие каталазы определяют в посевах на любой питательной среде, кроме приготовленной с
добавлением крови, по способности каталазы pa:cianrn> перекись водорода с выделением пузырьков газа. Если в
посевах на агаризованной среде обнаружено несколько типов колоний, то исследование на каталазу прово дят с
каждым типом колоний. Реакцию ставят с охлажденной до комнатной температуры культурой, содержа щей
микроорганизмы не старше 24-часового возраста (мертвые клетки искажают результаты), не допуская
соприкосновения клеток с нагретой поверхностью и применяя обезжиренные стерильные пробирки, пред
метные спекла, иипегки одним из способов, указанных ниже.
На колонию микроорганизмов, взятую с поверхности питательной среды, или извлеченную из нее и
помещенную на предметное стекло после 30 мин выдержки на воздухе пипеткой наносят каплю 3 ЧСного
раствора перекиси водорода.
Из посевов отбирают 2—3 см ’ культуральной жидкости, переносят ее в пробирку и нейтрализуют раство
ром гидроокиси натрия или соляной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. 1—2 капли нейтрализованной
культуральной жидкости пипеткой переносят на предметное стекло и после 30 мин выдержки на воздухе
добавляют к ней каплю 3 %-ного раствора перекиси водорода.
Если через 30—60 с на стекле появляются пугзырьки газа, то считают, что они образовались в результате
разложения перекиси водорода каталазой, образуемой микроорганизмами.
Если в посевах обнаружены газообразуюшис микроорганизмы, то при определении их каталазной актив
ности ставят контрольную пробу аналогично пробе на каталазу, но без добавления перекиси водорода. Газооб
разуюшис микроорганизмы относят к каталазоположитсльмым при отсутствии пузырьков газа в контрольной
пробе или при явно повышенном газообразовании в пробе с перекисью водорода по сравнению с контрольной
пробой.
Мезофильные и термофильные бациллы образуют каталазу, меэофильные и термофильные клостридин
не образуют каталазу, молочнокислые микроорганизмы каталазу нс образуют, но разложение перекиси водо
рода у молочнокислых микроорганизмов рода Pcdiococcus возможно за счет фермента псевдокататазы. Опре
деление псевдокаталазы у микроорганизмов нссгюрообразуюшнх. грамположительных. неподвижных прово
дят но ГОСТ 10444.11.
Г.2 Микроскопнрованис посевов
Микроскопируют мазки, приготовленные из первичных посевов. Если при микроскопировании возника
ет сомнение в однотипности обнаруженных микроорганизмов, то микроскоггируюг мазки, приготовленные
из каждого типа колоний, обнаруженных в посевах на агарнзованные среды.
267
II