ГОСТ Р 70468—2022
10.24Проводят испытания остальных образцов, а затем по одному отрицательному и положи
тельному контролям — для каждого испытуемого материала.
11 Проведение количественной оценки результата испытания
11.1 Для количественной оценки результата испытания используют определение титра бактерио
фага Phi Х174 методом агаровых слоев по Грациа [3].
11.2 За 12 ч до проведения испытания готовят питательные среды:
- 1,5 % мясо-пептонного агара (МПА), стерильно разлитого на чашки Петри по 25 мл;
- стерильные пробирки с разлитым мясо-пептонным бульоном (МПБ) по 4,5 мл в каждой;
- 0,7 % МПА в пробирках по 2,5 мл.
В день проведения испытания из жидкости, содержащей титруемый бактериофаг, готовят в про
бирках с жидкой средой ряд последовательных разведений. Затем в пробирку с 0,7 % МПА, расплав
ленным и остуженным до 45 °С — 50 °С, вносят 1 мл соответствующего разведения исследуемого
бактериофага, слегка перемешивают, добавляют 0,1—0,2 мл 1-миллиардной взвеси
Е. coli
С, чувстви
тельной к бактериофагу, опять слегка перемешивают и содержимое пробирки выливают в чашку с МПА
(вторым слоем). После остывания среды чашки инкубируют в термостате при температуре 37 °С в тече ние
18—20 ч. Титр фага определяют путем подсчета количества негативных колоний на параллельных чашках
и умножением полученного среднеарифметического значения на показатель разведения.
11.3 Результаты интерпретируют/обрабатывают, как описано в разделе 12.
12 Обработка результатов
12.1 При наличии аэрозольного/воздушного загрязнения, если наблюдаются какие-либо фоновые
показатели (выше нуля), испытание считается недействительным.
12.2 При испытаниях отрицательных контрольных образцов не должен обнаруживаться перенос
бактериофага Phi-X174 в количестве < 1 БОЕ/см3 (мл).
12.3 При испытаниях положительных контрольных образцов должен обнаруживаться перенос
бактериофага РЫ-Х174 в количестве > 1 БОЕ/см3(мл).
12.4 Дополнительную пробу нестерильного материала, испытываемую в форме бланковой пробы
для подтверждения того, что материалы не были загрязнены бактериофагом РЫ-Х174 до начала ис
пытания, учитывают, но не анализируют.
12.5 Критерии приемлемости испытания
12.5.1 Образцы материала медицинской одежды, в которых отсутствуют негативные частицы бак
териофага РЫ-Х174 после проведения количественного анализа, проходят испытание.
12.5.2 Возможность ложноположительных результатов при соблюдении соответствующих мер
предосторожности и надлежащих асептических методов при проведении испытания будет сведена к
минимуму. При наличии сомнения повторяют испытания на выборке, сделанной статистически досто
верным методом по ГОСТ Р ИСО 2859-1.
12.5.3 С помощью этого метода испытания получают количественную оценку проницаемости ма
териала, которая подтверждает приемлемость проведенного испытания и получение положительно го
или отрицательного результата по обеспечению барьерных функций материала, однако количество
бляшкообразующих единиц на кубический сантиметр (миллилитр) не должно использоваться для меж
лабораторного сравнения.
Примечание — Высокая точность метода достижима при подтверждении в процессе испытания крите
риев приемлемости испытания.
12.6 Снижение определяемого титра бактериофага РЫ-Х174
Титр испытательной суспензии бактериофага определяют до и после испытания. Для титрова
ния после испытания используют слитую из испытательной камеры испытательную суспензию бакте
риофага. Если титр испытательной суспензии бактериофага РЫ-Х174 во время испытания стал ниже
(1,0 • 108) БОЕ/см3(мл), испытание признают неприемлемым и повторяют его с таким начальным ти
тром, чтобы обеспечить его значение (1,0 • 108) БОЕ/см3(мл) в конце 60-минутного испытания.
11