ГОСТ Р 70468—2022
Затем собирают фаголизат в стерильную емкость, добавляют хлороформ, выдерживают в тече
ние 40 мин при непрерывном шуттелировании с последующим центрифугированием в течение 40 мин
при 5000 мин-1 .
Надосадочную жидкость стерилизуют фильтрацией через фильтр диаметром пор 0,22 мкм и про
пускают полученный фильтрат через колонку, содержащую агент, аффинный к эндотоксину.
Полученный фаголизат содержит эшерихиозный бактериофаг в титре Ю10 БОЕ/мл при отсутствии
бактерий, ингредиентов использованной питательной среды и при концентрации эндотоксина менее 50
ЕЭ/мл.
9.2Провокационную суспензию бактериофага приготавливают, разбавляя бактериофаг, под
готовленный в соответствии с 9.1 буферным раствором до требуемой концентрации не менее
(1,0 • 108) БОЕ/см3(мл). Конечную концентрацию бактериофага контролируют с помощью процедуры
количественного анализа (см. раздел 11).
10 Проведение испытания
10.1 Толщину каждого образца материала измеряют с точностью до 0,02 мм (при необходимости).
10.2 Определяют массу каждого образца (при необходимости).
10.3 Размер образца должен соответствовать размеру испытательной камеры используемого ис
пытательного оборудования.
10.4 Определяют совместимость каждого испытуемого материала (при необходимости).
10.4.1 Некоторые испытуемые материалы могут искажать результаты исследования на проник
новение вируса, тем самым делая их недействительными. Результаты испытания на проникновение
вируса могут быть искажены в следующих случаях:
- инактивация бактериофага РЫ-Х174 или бактерии-хозяина Е. со//. С.;
- компонентами, содержащимися в исследуемых материалах или задерживающих фильтрах
(если они используются);
- связывание бактериофага РЫ-Х174 с испытуемыми материалами или задерживающими филь
трами (если они используются);
- высыхание бактериофага Phi-X174.
Должна быть определена совместимость испытательных материалов, задерживающих фильтров
(если они используются) и микроорганизмов, используемых в испытании.
10.4.2 Определение содержания ингибирующих веществ в испытуемом материале (или за
держивающем фильтре, если он используется)
10.4.2.1
Проверяют три образца, представляющих каждый материал, подлежащий испытанию.
10.4.2.2
После того, как стерильную камеру размещают горизонтально на лабораторном столе,
образец помещают внешней поверхностью в резервуар камеры.
10.4.2.3 Стерильные части камеры собирают, как показано на рисунке 1.
10.4.2.4 Болты в испытательной камере закручивают до 13,6 Н ■м каждый.
10.4.2.5 В испытательную камеру, расположенную горизонтально на лабораторном столе, поме
щают образец, на который наносят 2,0 мкл аликвоты бактериофага РЫ-Х174, содержащей в общей
сложности от 900 до 1200 БОЕ.
Через 60 мин проводят количественный анализ, как описано в разделе 11.
10.4.2.6 Готовят контрольный образец, добавляя 0,002 см3 (мл) аликвоты из той же суспензии
бактериофага РЫ-Х174 в 5,0 см3 (мл) буферного раствора.
10.4.3Отношение С титра в контрольном образце к титру в анализируемом материале вычисля
ют по формуле
S’
С = —
(1)
где
А
— титр бактериофага в контрольном образце, БОЕ/см3 (мл);
В
— титр бактериофага в анализируемом образце, БОЕ/см3(мл).
Пример: А
—
5,0 ■108БОЕ/см3(мл)
В — 2,0- 108БОЕ/см3(мл).
Следовательно, Сравно 2,5.
8