ГОСТ 28420—2022
Готовые микропрепараты в горизонтальном положении сушат в сушильном шкафу либо на на
гревательном столике при температуре 40 °С в течение 24—48 ч. Края покровного стекла очищают от
излишков жидкости и дважды покрывают лаком* для защиты микропрепарата от высыхания.
Микропрепараты маркируют в соответствии с 5.3.4 и направляют для идентификации морфоло
гическим методом.
11 Правила подготовки вредных организмов к идентификации
молекулярно-генетическими методами
11.1 Общие положения
11.1.1 Выделение ДНК из насекомых или клещей проводят методом обработки протеиназой К с
последующим удалением белков без экстракции органическими растворителями, с помощью набора
реагентов для выделения ДНК.
11.1.2 Живых насекомых и клещей предварительно лишают жизнеспособности путем помещения
в 70 %-ный раствор этилового спирта.
Примечания
1Допускается использование раствора этилового спирта концентрацией от 90 %до 95 % (см. Б.2, приложе
ние Б), но при этом вредный организм будет непригоден для идентификации морфологическим методом.
2 Недопускается лишение жизнеспособности живого насекомого или клеща с помощью хлороформа, этила-
цетата и растворов формальдегида, включая формалин, из-за их негативного воздействия на результаты молеку
лярно-генетических анализов.
11.1.3 Высушенных насекомых (в том числе отобранных с поверхности клеевых ловушек в соот
ветствии с 7.2.4) и клещей необходимо тщательно просмотреть под стереомикроскопом с падающим
светом и убедиться в отсутствии мицелия грибов.
В случае если высушенные насекомые или клещи загрязнены субстратом или иными вещества
ми, проводят их очистку с помощью кисточки, смоченной в 95 %-ном растворе этилового спирта.
11.1.4 Замороженные насекомые и клещи не нуждаются в дополнительной обработке.
Примечание — Не допускается хранение насекомых и клещей под воздействием прямых солнечных
лучей или под включенным прибором с ультрафиолетовым излучением из-за их негативного воздействия на ре
зультаты молекулярно-генетических анализов.
11.1.5 От имаго насекомого отбирают ногу целиком (при наличии) или ее фрагмент (предпочти
тельнее бедро или голень), или голову (или ее фрагмент) с удаленными ротовыми частями.
Примечание — Вслучае выделения ДНК из насекомых, отобранных с поверхности клеевых ловушек в
соответствии с 7.2.4, рекомендуется отбирать часть ноги с минимальным содержанием энтомологического клея.
От сильно поврежденных имаго насекомых отбирают фрагмент груди с мышцами или брюшка с
тканями, по возможности не затрагивая кишечник.
От личинок насекомых отбирают фрагмент груди с мышечными тканями, не затрагивая кишечник.
От куколок насекомых отбирают фрагмент внутренних тканей без склеротизированных покровов.
11.2 Средства измерений, оборудование, реактивы, посуда и материалы
11.2.1При подготовке вредных организмов к выделению ДНК используют следующие средства
измерений, оборудование, реактивы, посуду и материалы:
- дозаторы одноканальные варьируемого объема (20—200 мм3) в комплекте со сменными одно
разовыми наконечниками с фильтром или без фильтра;
- гомогенизатор (пестик) тефлоновый;
- микроскоп стереоскопический (стереомикроскоп) с увеличением не менее чем в 50 раз с пада
ющим светом;
- рециркулятор;
- раствор ректификованного этилового спирта 70 %-ный;
- пробирки конические микроцентрифужные с крышкой типа Эппендорф вместимостью 1,5 см3;
* Возможно использование бесцветного лака для ногтей, лака для изделий издерева идр.
56