ГОСТ 34105—2017
7 Методы серологической диагностики бруцеллеза
7.1 Сущность методов заключается в выявлении в сыворотке крови животных специфических ан
тител к бруцеллезным антигенам.
7.2 Пластинчатая реакция агглютинации с бруцеллезным роз бенгал антигеном (РБП)
7.2.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в выявлении специфических антител в сыворотке крови животных,
основанном на способности антител сыворотки агглютинировать бруцеллезный антиген, результатом чего
является формирование выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в вцде крупных или
мелких хлопьев розового цвета.
7.2.2 Подготовка к исследованию
7.2.2.1 Приготовление 5 %-ного раствора хлорамина
Для приготовления 5 %-ного раствора хлорамина 5 г хлорамина растворяют в 100 см3водопровод
ной воды. Раствор используют свежеприготовленным.
Примечание — Могут применяться другие растворыдезинфицирующих средств, эффективные в отно
шении бактерийрода Brucella, которые готовят в соответствии с инструкциями к ним.
7.2.2.2Для массовых диагностических исследований используют комплект инструментов и приспосо
блений для серологических исследований крови животных на бруцеллез всоответствии с разделом 5.
Перед постановкой реакции роз бенгал антиген и исследуемые сыворотки выдерживают 30—40 мин
при комнатной температуре и встряхивают для получения однородной смеси.
Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных диагностических пластинах с лунками при
температуре не ниже 18 СС. На бортиках пластинки против каждой лунки записывают номер исследуе
мой сыворотки.
7.2.3 Проведение исследования
7.2.3.1 РБП применяют как экспресс-метод диагностики бруцеллеза у не иммунизированного про-
тивобруцеллезными вакцинами крупного рогатого скота, овец. коз. верблюдов, лошадей, северных оле
ней (маралов), свиней и собак.
Для исследования применяют тест-системы, используемые для диагностики бруцеллеза живот
ных в РБП.
Исследуемые сыворотки крови в дозе 0.03 см3(две капли) вносят на дно лунки при помощи шпри
ца-полуавтомата. или микропипетки, или одноканального дозатора с наконечником.
7.2.3.2 После внесения каждой сыворотки шприц-полуавтомат (микропипетку) трижды промывают фе
нолизированным 0.85 %-ным раствором хлористого натрия по 7.4.2 икончик подсушивают фильтровальной
бумагой. При исследовании сыворотки крови крупного рогатогоскота, лошадей, верблюдов в каждую лунку
рядом ссывороткой при помощи пипетки-капельницы для антигена, или микропипетки, илиодноканального
дозатора с наконечником вносят 0.03 см3антигена (две капли), а при исследовании сывороток крови овец,
коз и северных оленей (маралов), свиней и собак — 0,015 см3 антигена (одну каплю). Затем антиген в каж
дой лунке тщательно смешивают с сывороткой активными движениями ручного смесителя до получения
однородной жидкости, распределяя ее при этом по всей поверхности лунки. После смешивания сывороток
во всех лунках пластинки смеситель ополаскивают 0,85 %-ным фенолизированным раствором хлористого
натрия по 7.4.2 и просушивают марлевой салфеткой или фильтровальной бумагой.
Пластинку с сыворотками и антигеном покачивают в течение 4 мин осторожными вращательными
движениями вручную или при помощи аппарата, предназначенного для этой цели. При положительной
реакции в течение 4 мин появляются мелкие или крупные хлопья агглютината розового цвета.
В начале работы ставят контроль антигена с негативной и бруцеллезной сыворотками в тех же
дозах, а также антигена на спонтанную агглютинацию (к 0.03 см30.85 %-ного фенолизированного рас
твора хлористого натрия добавляют 0.03 см3роз бенгал антигена).
По окончании работы диагностические пластинки дезинфицируют погружением на 5 мин в
5 %-ный раствор хлорамина либо другого дезинфицирующего средства в концентрации и экспозиции,
определенной для возбудителя данного вида, затем обрабатывают любым моющим средством, про
мывают водопроводной, затем дистиллированной водой, высушивают на воздухе или в термостате при
температуре 37 °С—38 °С и используют повторно.
6