ГОСТ 34105—2017
В пробирки первого ряда антиген не вносят, они служат контролем сыворотки на самоагглютина-
цию. При наличии хлопьев, фибрина, эритроцитов и посторонних примесей результаты реакции агглю
тинации не учитывают.
После добавления к исследуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирка
ми интенсивно встряхивают для смешивания компонентов и помещают в термостат при температуре
37 °С—38 °С на 16—20 ч, затем выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и проводят
учет реакции.
7.4.3.5На территориях, угрожаемых или неблагополучных по бруцеллезу, проводят массовые серо
логические исследования. При этом допускается проведение исследований в двух разведениях. Сыво
ротки разливают индивидуальной микропипеткой (с резиновой грушей), или групповыми дозаторами Фло
ринского, или одноканальными пипеточными дозаторами в две серологические пробирки Флоринского в
дозах 0,02 и 0.01 см3(сыворотки крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов) или 0,04 и 0,02 см3при
исследовании сывороток овец, коз, оленей (маралов) исобак. Затем в каждую пробирку вносят по 1,0 см3
антигена, разведенногосоответствующим фенолизированным раствором хлористого натрия по 7.4.2 всо
отношении 1:20. При этом сыворотки крови будут разведены соответственно 1:50 и 1:100 или 1:25 и 1:50.
При получении положительных или сомнительных результатов РА при массовом исследовании
эти сыворотки исследуют в четырех разведениях.
Массовые исследования пушных зверей и морских свинок не проводят.
7.4.4 Обработка результатов
Результаты реакции учитывают визуально, определяя степень просветления жидкости, внешний
вид агглютината (при его наличии) или антигена на дно пробирки до и затем, после легкого встряхива
ния, оценивают в крестах по следующей схеме:
«+♦++» (четыре креста) — полное просветление жидкости, микробные клетки антигена осели на дно
пробирки в виде «зонтика», при легком встряхивании «зонтик» разбивается на хлопья и комочки, а жид
кость остается прозрачной (100 % агглютинации);
«♦++» (три креста) — неполное просветление жидкости и хорошо выраженный «зонтик» агглюти
ната (75 % агглютинации):
«♦+» (два креста) — неполное просветление жидкости, «зонтик» агглютината умеренно выражен
(50 % агглютинации);
«♦» (один крест) — едва заметное просветление жидкости, «зонтик» агглютината выражен слабо,
при встряхивании заметно небольшое количество хлопьев или комочков (25 % агглютинации);
«-» (минус) — просветления жидкости и образования «зонтика» агглютината не наступило, на
дне пробирки по центру образуется небольшой осадок микробов антигена в виде точки или пятна. При
встряхивании осадок легко разбивается, поднимается вверх в виде косички и равномерно распределя
ется в жидкости, которая при этом приобретает первоначальную мутность.
За титр антител принимают наибольшее разведение сыворотки, в котором произошла агглютина
ция на два креста («+♦»), что соответствует количеству международных единиц (ME) антител в 1 см3
сыворотки (например, сыворотка с титром 1:100 содержит 100 ME. 1:200 — 200 ME и т. д.).
Для более объективной оценки результатов РАготовят образцы сравнения мутности, соответству
ющие 75 %. 50 %. 25 % и 0 % просветления жидкости.
В четыре пробирки последовательно вносят 0,5; 1,0; 1,5 и 2.0 см3 антигена, разведенного
0,85 %-ным фенолизированным раствором хлористого натрия в соотношении 1:10. Затем в том же по
рядке в три первые пробирки добавляют 1.5; 1,0 и 0.5 см3соответствующего фенолизированного рас
твора хлористого натрия по 7.4.2. После перемешивания содержимого пробирок из каждой из них пере
носят по 1.0 см3 в серологические пробирки. Полученные образцы сравнения мутности соответствуют
75 %, 50 % и 25 % просветления жидкости. В четвертой пробирке просветление отсутствует. Образцы
сравнения мутности готовят каждый раз при постановке РАи выдерживают в термостате одновременно
с основной реакцией.
При массовых исследованиях в двух разведениях все сыворотки, давшие агглютинацию с оцен
кой не менее чем на два креста («♦+») в каком-либо из указанных разведений, исследуют повторно в
четырех разведениях.
В заключении лаборатории о результатах исследования должны быть отражены диагностическая
оценка каждой пробы (положительная, сомнительная, отрицательная) и конечное разведение (титр) сыво
ротки, в котором получен соответствующий результат, выраженный в международных единицах (например:
титр сыворотки крови крупного рогатого скота 1:200 с оценкой два — четыре креста — «положительная» 200
МЕ/см3;титр сыворотки 1:100 с оценкой два — четыре креста — «сомнительная» 100 МЕ/см3).
9