ГОСТ 34105—2017
Исследуемые и контрольные сыворотки в исходных разведениях в пробирках выдерживают в во
дяной бане, нагретой до 60 °С —62 °С в течение 30 мин.
При получении положительного результата исследования сыворотки крови животных в одном раз
ведении, для определения титра гемагглютининов в РИГА постановку реакции проводят в четырех раз
ведениях. при этом исходное разведение каждой сыворотки готовят заново.
Все сыворотки (исследуемые и контрольные) проверяют на отсутствие гемагглютинирующих
свойств.
В лунки первого, второго, третьего и четвертого рядов планшета вносят по 0.5 см3 и пятого ряда
по 0.25 см30.85 %-ного раствора хлористого натрия.
В лунки первого рядадобавляют по0.5см3,авлунки пятого ряда по0,25 см3исследуемых и контроль
ных сывороток в исходном разведении. После смешивания путем пипетирования по 0.5 см3разведенных
сывороток из лунок первого ряда переносят в лунки второго ряда, из лунок второго — в лунки третьего, из
лунок третьего — в лунки четвертого, из лунок четвертого ряда по 0.5 см3 разведенных сывороток
удаляют.
Во все лунки первых четырех рядов с разведенными сыворотками добавляют по 0.05 см3антиге
на в рабочем разведении, которое готовят путем смешивания равных объемов антигена и 0.85 %-ного
раствора хлористого натрия. В лунки пятого ряда вносят 0.05 см3 взвеси несенсибилизированных
эритроцитов в рабочем разведении (один объем несенсибилизированных эритроцитов ♦ один объем
0.85 %-ного раствора хлористого натрия).
Содержимое лунок перемешивают путем легкого постукивания по краю планшета до получения
равномерной взвеси антигена в сыворотке, выдерживают при температуре от 18 °С до 24 °С в течение
3—4 ч и проводят учет реакции.
Результат контроля на самоагглютинирующие свойства исследуемых и контрольных сывороток
должен быть отрицательным.
Допускается постановка реакции в два этапа: накануне готовят исходные разведения исследуе
мых и контрольных сывороток крови, прогревают при указанном выше режиме, хранят при температуре
от 2 °С до 8 °С и на следующий день исследуют.
После постановки реакции планшеты выдерживают в 1 %-ном растворе хлорамина или другом
антисептическом растворе 1.5—2.0 ч. Впоследствии их моют, как указано выше.
7.8.4 Обработка результатов
Реакции учитывают визуально и оценивают в крестах по следующей схеме:
«+♦♦+» (четыре креста) — 100 %-ная агглютинация эритроцитов, агглютинат в виде хорошо выра
женного «зонтика» покрывает все дно лунки, возможно сползание и заворачивание краев агглютината в
виде «зонтика»;
«+♦♦» (три креста) — 75 %-ная агглютинация эритроцитов, агглютинат в виде хорошо выраженно
го «зонтика» меньшего диаметра, чем при оценке реакции на четыре креста. В центре лунки возможно
образование с трудом различаемого кольца из осевших неагглютинированных эритроцитов;
«+♦» (два креста) — 50 %-ная агглютинация эритроцитов, осевшие неагглютинированные эритро
циты образуют на дне лунки ровное кольцо с зернистостью вокруг него;
«+» (один крест) — на дне лунки кольцо коричнево-красного цвета:
«-» (минус) — эритроциты оседают в виде компактной «пуговки» или колечка.
За титр антител принимают наибольшее разведение сыворотки, в котором произошла агглюти
нация эритроцитов с оценкой четыре или три креста. Реакции с оценкой два креста («♦+»), один крест
(«+») и минус («-») считают отрицательными.
7.9 Иммуноферментный анализ (ИФА)
Сущность метода заключается в выявлении в образце сыворотки крови животных иммуноглобули
нов класса G к бактериям рода Brucella.
7.9.1 Подготовка к исследованию
7.9.1.1 Приготовление растворов кислоты серной концентрацией 1 моль/дм3 и кислоты соляной
концентрацией 1 моль/дм3по ГОСТ 25794.1 (пункт 2.1).
7.9.1.2 Приготовление рабочего раствора ФСБ-Т
ФСБ-Т — концентрированный раствор буфера (флакон N9 1) разводят в 25 раз дистиллированной
водой и тщательно перемешивают. Для этого содержимое одного флакона концентрата в объеме 26 см3
18