ГОСТ 34105—2017
переносят в мерную колбу и доводят объем до 650 см3дистиллированной водой. Если в концентрате
присутствуют кристаллы, то его перед разведением нагревают и тщательно взбалтывают. В случае ис
пользования одного или нескольких стрипов планшета в чистый флакон отбирают необходимое для
данного исследования количество составных частей ФСБ-Т в соответствии с таблицей 6.
Таблица 6 — Разведения ФСБ-Т
Компоненты
Количество используемых стрипов
12345в7
а
9Ю1112
Объем.
СМ3
Концентрат ФСБ-Т. см32
468101214
1618202226
Вода дистиллированная, см348
96144192 240288336
384432 480528 624
Допускается хранить неиспользованный рабочий раствор ФСБ-Т в течение 5 сут в холодильнике
при температуре от 2 °С до 8 °С.
Все остальные компоненты набора для ИФА по 5.3 готовы к употреблению.
Окисляющие агенты, ионы металлов, моющие средства на посуде могут разлагать ТМБ-субстрат.
Во избежание ложных результатов необходимо тщательно отмывать посуду раствором кислоты серной
концентрацией 1моль/дм3 или кислоты соляной концентрацией 1моль/дм3 с последующей тщательной
отмывкой водой дистиллированной.
7.9.2 Проведение исследования
7.9.2.1 Для исследования сывороток крови в ИФА отбирают необходимое количество стрипов.
нумеруют их в соответствии с описью исследуемых проб водостойким маркером из-за возможного вы
падения из рамки-держателя во время тестирования. Оставшиеся стрипы хранят в полиэтиленовом
пакете с влагопоглотителем, при температуре от 2 °С до 8 °С.
7.9.2.2 Для внесения контрольных сывороток можно использовать любые лунки планшета. Для
этого в лунку вносят по 100 мм3 К+ (флакон N
q
4). в две другие лунки планшета — по 100 мм3 К- (фла
кон № 5). В остальные лунки планшета вносят по 80 мм3РБР-С (флакон Ne 2). При постановке ИФА на
одном стрипе допускается использовать для К- и К+ по одной лунке.
7.9.2.3 В остальные лунки планшета с РБР-С вносят по 20 мм3 исследуемых сывороток. Раствор
перемешивают пять раз пипетированием. не касаясь дна лунки, цвет РБР-С должен измениться: проис
ходит незначительное просветление раствора.
7.3.2.4 После внесения проб сывороток планшет помещают в пластиковыйпакет или накрывают крыш
кой и инкубируют30 минпри температуре37 °С. После инкубации лункиосвобождают от содержимого резким
встряхиванием ипять раз промывают рабочим раствором ФСБ-Т. добавляя каждый раз по 300 мм3раствора
в лунку, и выждав определенное время (от 30 с до 1 мин), вытряхивают содержимое. Во время обработки
большого количества планшетов можно оставлять их с промывочным раствором до 20 мин. Затем планшет
подсушиваютпостукиванием посложенной внесколько слоев фильтровальной бумаге. Вовсе используемые
лунки планшета вносят по 100 мм3 раствора конъюгата (флакон N9 3); планшет помещают в
пластиковый пакет или накрывают крышкой и вьщерживают 30 мин при температуре 37 °С.
После повторной инкубации проводят процедуру промывания лунок рабочим раствором ФСБ-Т по
описанной выше методике. После промывки во все используемые лунки планшета вносят по 100 мм3
раствора ТМБ-субстрата (флакон N9 6) и выдерживают 15 мин при температуре 37 4С в темноте. По
истечении указанного времени реакцию останавливаютдобавлением в каждую используемую лунку по 50
мм3 стоп-реагента (флакон N9 7).
7.9.3 Обработка результатов
Результаты ИФА регистрируют на спектрофотометре. Оптическую плотность измеряют при длине
волны 450 нм. Нулевой уровень задают по воздуху. Результаты учитывают только в том случае, если в
лунках с К- среднее значение оптической плотности (К-) не более 0.2 ед. о. п.. а разница средних значе
ний оптической плотности между (К+) и (К-) превышает 0.35 ед. оптической плотности.
Если значение оптической плотности исследуемого образца не превышает 0.3 ед. о. п„ то резуль
тат анализа считают отрицательным (lg G к бактерии рода Brvcella не определены).
Если значение оптической плотности исследуемого образца сыворотки попадает в интервал от
0.3 до 0.9 ед. о. п.. то результат анализа сомнительный. Рекомендуется повторить исследование такой
19