ГОСТ 34105—2017
При постановке реакции ставят контроли:
- негативная и бруцеллезная сыворотки в разведении 1:5 и 1:10 с антигеном и в разведении 1:5
без антигена;
- гемолитическая система в рабочей дозе без сыворотки, антигена и комплемента (0,6 см3 гемо
литической системы и 0.6 см30,85%-ного раствора хлористого натрия) — полная задержка гемолиза;
- антиген с 0,85 %-ным раствором хлористого натрия и гемолитической системой (0,2 см3 анти
гена в рабочем разведении: 0.4 см30.85 %-иого раствора хлористого натрия и 0.6 см3гемолитической
системы) — полная задержка гемолиза.
7.5.6 Обработка результатов РСК и РДСК
Реакцию связывания комплемента и реакцию длительного связывания комплемента учитывают
визуально. При постановке реакции в одной пробирке (при массовом исследовании) учет проводят
один раз — сразу после извлечения штативов из водяной бани. При исследовании в трех пробирках — че рез
3—4 ч. когда в контрольных пробах с бруцеллезной сывороткой эритроциты осядут на дно пробир ки, или
на следующий день (в этом случае штативы с пробирками оставляют в холодильнике).
Результаты реакции оценивают в крестах по следующей схеме:
«+♦♦+» (четыре креста) — отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость прозрачная и бесцвет
ная. осадок 100 % эритроцитов на дне пробирки;
«+♦+» (три креста) — гемолиз 25 % эритроцитов, осадок 75 % эритроцитов;
«+♦» (два креста) — гемолиз 50 % эритроцитов, осадок 50 % эритроцитов;
«+» (один крест) — гемолиз 75 % эритроцитов, осадок 25 % эритроцитов;
«-» (минус) — гемолиз 100 % эритроцитов, осадок эритроцитов отсутствует, жидкость интенсивно
окрашена гемоглобином.
Степень гемолиза эритроцитов при необходимости определяют по шкале, которую готовят перед
учетом реакции. Для этого из штатива выбирают пять пробирок с полным гемолизом, сливают их со
держимое в одну и разводят по схеме, представленной в таблице 5.
Таблица 5
Номера пробирок
Наименование
компонентов
1
2345
Гем олизированная ж идкость, см 3
1.0
0.750.50.25
—
0.85 %-ный раствор хлористого натрия, см3
—
0.250.50.751.0
Гемолиз. %100
755025
—
Оценка в крестах*-»
«+»«++»«+++»
«++++»
Процент гемолиза эритроцитов в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют путем
сравнения со шкалой.
Реакцию считают:
- положительной — при задержке гемолиза на два—четыре креста в одном или в двух разведе
ниях сыворотки (1:5 или 1:10) и полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена);
- сомнительной — при задержке гемолиза с оценкой в один крест в одном или двух разведениях
сыворотки и полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена):
- отрицательной — при полном гемолизе эритроцитов в двух или трех пробирках.
7.6 Реакция иммунодиффузии (РИД) с О-полисахаридным антигеном (О-ПС)
7.6.1 Сущность метода состоит в выявлении бруцеллезных антител, основанном на способности
антител и антигена диффундировать в агаровом геле и при взаимодействии образовывать комплекс
антиген-антитело, наблюдаемый в виде линии преципитации.
7.6.2 Приготовление 0.8 %-ного агар-агара и подготовка чашек Петри
Для приготовления 200 см3 агара 17 г хлористого натрия и 1,6 г микробиологического агар-агара
переносят в стеклянную колбу вместимостью 500 см3, добавляют 200 см3дистиллированной воды.
14