ГОСТ 34105—2017
7.8 Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА)
7.8.1 Сущность метода
Метод основан на выявлении бруцеллезным эритроцитарным антигеном специфических антител
в сыворотке крови больных бруцеллезом животных или иммунизированных вакцинами против бруцел
леза животных.
7.8.2 Подготовка к исследованию
7.8.2.1 Приготовление 1 %-ного раствора хлорамина
Для приготовления 1 %-ного раствора хлорамина 1 г хлорамина растворяют в 100 см3водопрово
дной воды. Раствор используют свежеприготовленным.
7.8.2 2 Приготовление хромовой смеси
В фарфоровую чашку вместимостью 300—500 см3 помещают 5 г тонкоизмельченного в фарфо
ровой ступке двухромовокислого калия или 6 г бихромата натрия, добавляют 100 см3 концентриро
ванной технической серной кислоты и осторожно нагревают на водяной бане до полного растворения
двухромовокислого калия (бихромата натрия). Хромовую смесь хранят при комнатной температуре до
момента изменения цвета с темно-оранжевого до темно-зеленого.
7.8.2.3 Подготовка планшетов
Планшеты подготавливают к работе следующим образом: новые, погружают на 20—30 мин в те
плый раствор с моющим средством и каждую лунку моют в этом растворе вращательным движением
ватной или ватно-марлевой пробки. Ершом не пользуются, во избежание повреждения поверхности
лунки. Затем планшеты не менее б раз промывают проточной водопроводной водой, ополаскивают
дис тиллированной водой и сушат при комнатной температуре или в термостате.
Допускается обработка планшетов хромовой смесью в течение одних суток, затем их промывают
проточной водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и сушат.
При работе лицо. руки, одежду защищают от попадания хромовой смеси.
Реакцию ставят на 0.85 %-ном растворе хлористого натрия. Сыворотку бруцеллезную сухую реги-
дратируют дистиллированной водой или 0.85 %-ным раствором хлористого натрия.
7.8.3 Проведение исследования
Крупный рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, исследуют в сроки, предусмотрен
ные инструкциями по применению вакцин.
Мелкий рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, в РИГА не исследуют.
Реакцию ставят с использованием набора для серологической диагностики бруцеллеза крупного
и мелкого рогатого скота для РИГА.
Реакцию проводят в объеме 0.55 см3 (0.5 см3разведения сыворотки и 0,05 см3антигена) в про
бирках Флоринского.
При массовых исследованиях постановку реакции можно проводить с использованием исследу
емых сывороток в одном (исходном) разведении. После прогревания исследуемые и контрольные сы
воротки по 0,25 см3 вносят в лунки планшетов и добавляют в них по 0,25 см3 0.85 %-ного раствора
хлористого натрия.
В каждую лунку с разведением сыворотки вносят по 0,05 см3антигена в рабочем разведении.
Содержимое лунок перемешивают до получения равномерной взвеси антигена в сыворотке, вы
держивают при температуре от 18 °С до 26 °С в течение 3—4 ч и проводят учет реакции.
Сыворотки от неиммунизированного или иммунизированного неагглютиногенными противобру-
целлезными вакцинами крупного рогатого скота исследуют с разведения 1:50. Исходное разведение
1:25 готовят путем внесения 0.1 см3сыворотки в пробирки, содержащие 2.4 см30.85 %-ного раствора
хлористого натрия.
Сыворотки от крупного рогатогоскота, иммунизированного агглютиногенными противобруцеллезными
вакцинами, исследуют с разведения 1:100. Исходное разведение 1:50 готовят путем внесения 0.1 см3сы
воротки в пробирку с 4.9 см30.85 %-ного раствора хлористого натрия или по 0.05 см3сыворотки и 2.45см3
0.85 %-ного раствора хлористого натрия, если используются пробирки вместимостью до 5 см3.
Сыворотки от мелкого рогатого скота исследуют с разведения 1:25. Исходное разведение 1:12.5
готовят путем внесения 0.2 см3 сыворотки в пробирки, содержащие 2.3 см30.85 %-ного раствора хло
ристого натрия.
Одновременно с исследуемыми сыворотками аналогично готовят разведения контрольных сыво
роток: бруцеллезной и негативной.
17