ГОСТ 34105—2017
Результаты исследования исследуемой и контрольных сывороток, серию антигена, срок его год
ности записывают в журнал серологических исследований.
7.5 Реакция связывания комплемента (РСК) и реакция длительного связывания
компломонта на холоде (РДСК)
7.5.1 РСК применяют при диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота (буйволов, яков. зебу),
овец. коз. свиней, верблюдов, лошадей, оленей (маралов), собак и пушных зверей.
Сущность реакции состоит в том. что при соответствии друг другу антигены и антитела образуют
иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент, т. е. проис
ходит связывание комплемента комплексом антиген — антитело.
7.5.2 РДСК применяют вместо РСК. в том числе для исследования сывороток, обладающих анти-
комплементарными свойствами.
Сущность реакции состоит в образовании иммунного комплекса антиген — антитело в присут
ствии комплемента на холоде в течение нескольких часов.
7.5.3 Подготовка к исследованию
7.5.3.1 Приготовление 0,85 %-ного раствора хлористого натрия
Для приготовления 1дм3раствора 8.5 г хлористого натрия растворяют в дистиллированной воде,
устанавливают pH 6.8—7.2 ед. pH 5 %-ным раствором натрия гидроокиси и дважды фильтруют через
бумажный фильтр. 0.85 %-ный раствор хлористого натрия хранят в стеклянной бутыли, закрытой рези
новой или корковой пробкой, и используют в течение 1 мес.
7.5.3.2 Приготовление 5 %-ного раствора натрия гидроокиси
Для приготовления 5 %-ного раствора натрия гидроокиси 5 гнатрия гидроокиси растворяют в 100 см3.
Раствор хранят при комнатной температуре в течение месяца.
7.5.3.3 Образцы сыворотки крови и компоненты РСК и РДСК разводят 0.85 %-ным раствором хло
ристого натрия по 7.5.3.1. Сухой комплемент регидратируют и титруют по ГОСТ 16446.
Берут такое количество флаконов (ампул), в которых содержится необходимое для проведения
всего опыта количество комплемента. В каждый флакон (ампулу) вносят 0.85 %-ный раствор хлористо го
натрия в объеме, указанном на этикетке, и. не встряхивая, помещают в холодильник на 20—30 мин.
Растворившийся комплементосторожно перемешивают путем легкого встряхивания флаконов (ампул),
сливают в одну пробирку, смешивают и помещают в холодильник при температуре от 4 5Сдо 10 еС. Не
посредственно перед внесением в пробирки для титрования дегидратированный комплемент разводят
0,85 %-ным раствором хлористого натрия в соотношении 1:20. а остальной — хранят в холодильнике.
Рабочее разведение комплемента также готовят непосредственно перед внесением в пробирки при по
становке реакции. Рабочий титр комплемента должен быть на два интервала больше его титра.
Количество комплемента X. см3,необходимого для проведения опыта, рассчитывают по формуле
где А — рабочий титр комплемента, см3;
В — количество пробирок в опыте, шт;
20 — исходное разведение комплемента (1:20).
2
Пример —
X =
0.12
0
100
= 0.6.
Так как количество комплемента в рабочем разведении, требующемся для всей реакции (на 100
пробирок), равно 20 см3 (0.2 ■100), то к 0,6 см3 регидратированного комплемента добавляют 19.4 см3
0,85 %-ного раствора хлористого натрия.
Гемолитическую сыворотку титруют по ГОСТ 16445 при использовании каждой новой серии и по
истечении срока годности.
Рабочий титр гемолитической сыворотки для РСК и РДСК составляет удвоенную дозу от титра.
Так. если титр сыворотки равен 1:1500, то рабочий титр в РСК и РДСК будет 1:750.
Эритроциты барана — 2.5 %-ную взвесь эритроцитов барана в 0.85 %-ном растворе хлористого
натрия для РСК и РДСК готовят из свежей или консервированной крови барана по ГОСТ 16446. Дефи-
бринированную кровь фильтруют через марлю и консервируют стрептомицином из расчета 1г препара
та. растворенного в 10—20 см3стерильного 0.85 %-ного раствора хлористого натрия, на 100 см3крови.
10