ГОСТ 34105—2017
Колбу закрывают непромокаемым материалом (пергаментной бумагой, фольгой и т. п.) и помеща
ют на водяную баню, которую также накрывают для предотвращения испарения воды при кипении во
дяной бани. Для полного расплавления агара колбу выдерживают в водяной бане в течение 35—45
мин с момента закипания воды. В чашки Петри, помещенные на горизонтальную поверхность,
вносят по 14—18 см3 расплавленного агара. Чашки оставляют в течение 1ч с приоткрытыми крышками.
После за стывания агара чашки Петри закрывают крышками и помещают в холодильник при
температуре от 2 °С до 8 °С. хранят не более 5 сут.
При помощи штампа в геле агара делают отверстия (лунки). В каждой чашке прорезают не менее
шести семилуночных розеток, каждая из которых состоит из семи лунок: одна лунка в центре диаме
тром 3 мм, остальные шесть лунок диаметром 5 мм по окружности, расстояние между центральной и
периферическими лунками — 3 мм. Образовавшиеся дисхи геля удаляют из лунок канюлей, соединен
ной с вакуумным или водоструйным насосом (или любым другим способом).
7.6.3 Проведение исследования
7.6.3.1 В РИД с О-ПС антигеном исследуют на бруцеллез сыворотку крови крупного и мелкого
рогатого скота и северных оленей с цельюдифференциации животных, инфицированных от вакциниро
ванных: для дифференциации неспецифических реакций, обусловленных родственной с бруцеллами
микрофлорой, в том числе иерсиниями.
Для исследования используют сыворотки крови животных неконсервированные и консервирован
ные. Не консервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 сут со дня взятия крови
при условии хранения их при температуре от 4 ®Сдо 8 X . Сыворотки, консервированные фенолом или
борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 сут; замороженные сыворотки — в течение
3 сут после однократного оттаивания. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследова
нию на бруцеллез но подлежат.
7.6.3.2 Реакцию иммунодиффузии проводят в чашках Петри. В центральную лунку вносят 0.02 см3
О-ПС антигена, а в периферические — по 0.04 см3исследуемых сывороток крови.
На каждой чашке Петри ставят контроль с положительной бруцеллезной сывороткой (проципити-
рующей).
После внесения компонентов чашки Петри закрывают крышками и помещают во влажную камеру
(эксикатор) и выдерживают при температуре от 18 °С до 26 °С.
7.6.4 Обработка результатов
7.6.4.1 Учет результатов проводят визуально в косом проходящем свете с помощью осветителя
через 24 и 48 ч после постановки реакции.
Линии преципитации между лунками с антигеном и исследуемой сывороткой, сформировавшиеся
через 24 ч. свидетельствует о положительной реакции.
Сыворотки крови, давшие линию преципитации через 48 ч. подлежат повторному исследованию.
Линии преципитации, сформировавшиеся через 24 или 48 ч при повторном исследовании, свиде
тельствуют о положительной реакции.
При получении положительного результата в реакции иммунодиффузии, животное признают боль
ным бруцеллезом.
7.6.4.2 Применение РИД с О-ПС антигеном при диагностике бруцеллеза
а) крупного рогатого скота в случаях.
1) в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых не применяли вакцины против бруцел
леза. исследуют сыворотки крови животных, сомнительно или положительно реагирующие в РА и (или)
РСК (РДСК);
2) в благополучных побруцеллезу хозяйствах, в которых животных вакцинируют против бруцелле
за агтлютиногенными вакцинами:
- для контроля эпизоотического состояния по бруцеллезу животных не ранее чем через 1,5 мес
после вакцинации;
- для дифференциации положительных реакций, полученных в РА (не выше 200 ME) или (и) РСК
(РДСК) не выше чем в разведении 1:10 по истечении 6 мес после введения вакцины;
3) в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых животных вакцинируют против бруцел
леза агглютиногенными вакцинами:
- через 1.5 мес и далее один раз в месяц в течение 6 мес после иммунизации или реиммунизации
с целью раннего выявления больных бруцеллезом животных;
15