ГОСТ 33463.6—2016
- навеску питательной среды следует предварительно замочить на время от 0.5 до 1ч в небольшом объеме
дистиллированной воды;
- раствор питательной среды довести до кипения и кипятить при постоянном помешивании в течение не
более 1мин до полного расплавления агара, строго соблюдая время кипячения;
- раствор расплавленного агара быстро охладить до температуры от 45 *С до 50 *С следующим способом:
емкость, в которой готовили энтерококкагар. поместить в сосуд с водой температурой от 45 СС до 50 °С. постоянно
перемешивая питательную средудо охлаждения; затем разлить в чашки Петри до застывания. Готовую питатель
ную дифференциальную среду вчашках Петри хранитьа защищенном от света месте при температуре (5
±
3) “С не
болеедвух недель.
Д.9.2 Приготовление азидной среды Сланеца-Бертли (модификация)
Сухой питательный агар в количестве, указанном производителем, и 4 г калия фосфорнокислого однозаме-
щенного расплавляют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды. Разливают в термостойкие емкости и
стерилизуют при температуре (120
±
2) ‘С в течение 20 мин.
Перед применением в расплавленную и слегка остуженную основу среды из расчета на 100 см3добавляют
2см3дрожжевогоэкстракта. 1г глюкозы, 0.04 газида натрияи 1см31%-ного водного раствора 2.-3,-5-трифенилтет-
разолий хлорида(ТТХ). Тщательно перемешивают, устанавливаютpH раствора 7.1 иразливаютвчашки Петри сло
ем толщиной 0.5 см. Готовую среду в чашках Петри хранить в защищенном от света месте при температуре (5
±
3) ‘С не болеедвух недель.
П р и м е ч а н и е — Азид натрия — высокотоксичное имутагенноевещество. При работес ним должны при
меняться средства защиты органовдыхания. Азмдсодержащие среды не должны смешиваться ссильными кислота
ми во избежание образования токсичных компонентов. Растворы, содержащие азид натрия, могут образовывать
взрывоопасные компоненты при контакте с металлическими трубопроводами.
Д.9.3 Приготовление солевого агара с ТТХ для подтверждения наличия энтерококков
Сухой питательный агар в количестве, указанном производителем, и 65 г хлорида натрия растворяют при
нагревании в 1000см3дистиллированной воды,послечего разливают мерно в термостойкие емкости и стерилизуют
при температуре (120 т 2 ) ‘Св течение 20 мин.
Передприменением в расплавленную основусреды израсчета на 100см3добавляют 1гглюкозы. 2см3дрож
жевого экстракта или другогодрожжевого препарата. 1см3 водного 1%-ного раствора ТТХ. Тщательно перемеши
ваюти разливают в чашки Петри. Готовую средув чашках Петри хранята защищенном от света месте при (5 i 3) ’С не
более двух недель.
Д.9.4 Приготовление желчь-эскулин-азидного агара
Компоненты среды приведены в таблице Д.1.
Т а б л и ц а Д.1
Компоненты среды
Масса (объем)
Триптон. г
17.0
Пептон, г
3.0
Дрожжевой экстракт, см3
5.0
Дегидратированная желчь, г
10.0
Хлорид натрия, г
5.0
Цитрат аммония-железа (III), г
0.5
Эскулин. г
1.0
Азид натрия, г
0.15
Агар (в зависимости от инструкций производителя), г
От 8 до 18
Вода дистиллированная, см3
Доводится до 1000
Составляющие растворяют в воде при кипячении и стерилизуют при температуре (121 * 1) *С в течение
15 мин. pH раствора после стерилизации (при температуре 25 СС)—(7,1 г 0.1). Средуохлаждают, медленно выли
вают в стерильные чашки Петри слоем 3—5 мм и оставляют для остывания на горизонтальной поверхности.
Срок хранения готовой среды в темноте — не болеедвух недель при температуре (5
±
3) ‘С.
27