Приложение Д
(обязательное)
ГОСТ 33463.6—2016
Приготовление питательных сред, растворов, реактивов
Д.1 Общие положения
Сухие питательные среды хранят всухих проветриваемых помещениях, в темноте, при комнатной температу
ре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, скомками), а
также с истекшим сроком годности не используют.
Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную по
ГОСТ 6709.
Питательные среды готовят апосуде из инертного материала.
Учитывая возможное изменение pH питательных сред после кипячения и стерилизации, окончательный конт
роль pH проводят из контрольного флакона с готовой средой при температуре 25 °С с использованием индикатор
ных полосок или потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода.
После стерилизации питательные среды оставляютдля охлаждения при комнатной температуре. При необ
ходимости розлива в чашки Петри среды охлаждаютдо температуры (50—60) “С.
1емпература сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.
Д.2 Питательный бульон
Д.2.1 Питательный бульон готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанно
му на этикетке.
Д.2.2 Питательный бульон (десятикратный)для колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого
препарата, указанной на этикетке.
Д.З Питательный агар
Д.3.1 Питательный агар готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному
на этикетке.
Д.З.2 Питательный агар для определения колифагов прямым методом готовят, увеличивая навеску сухого
препарата в 2 раза от рецептуры приготовления (см. ДЗ приложенияД).
Д.3.3 Питательныйагар запрещается выдерживатьв расплавленном состоянии бопее 8ч. Оставшийся неис
пользованным агар повторному расплавлению не подлежит.
Д.3.4 Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар
микробиологический (3 г) растворить при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды. Довести pH до 7,0—7.2.
разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121 "С в течение 15 мин.
Д.З.5 Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1см3
питательного агара, приготовленного по стандартной рецептуре. В стерильных условиях на стерильной дистилли
рованной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 см3. В готовый питательный агар, отме
ренный по объему и остуженный до температуры (4 7 *2 )вС, вносят приготовленный стерильный раствор
стрептомицина из расчета 0.1 см3на 10см3 питательногоагара. Разливают в пробирки для приготовления скошен
ного агара.
Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.
Д.4 Фуксин-сульфитная среда Эндо
Д.4.1 Основная модификация
Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы
влаги, чашки перед лосевом необходимо подсушить в термостате. Срок хранения чашек со средой — не более 2—
3сут в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.
Д.4.2 Повышение дифференцирующих свойств среды
Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до (60— 70) аС среду перед
разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 см3 среды 0,2 см35 %-ного спиртового раствора основного фук
сина. Срок хранения раствора фуксина — не бопее 1мес.
Д.4.3 Модификация среды с добавлением розоловой кислоты
В случаях, когда мембранные фильтры зарастают посторонней микрофлорой, не относящейся к бактериям
кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 см3среды Эндо 0.2 см35 %-ного спиртового
раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты — не более 1мес.
25